保健食品中槲皮素山柰素异鼠李素的高效液相色谱测定.doc

保健食品中槲皮素山柰素异鼠李素的高效液相色谱测定 Determineation of quercetin、keampferol、isorhamnetin by high - performance liquid chromatogramphy in health food 适应范围 本方法规定了以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料生产的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的HPLC测定方法。 本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料生产的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的HPLC测定方法。 本方法的检测限分别为：槲皮素0.002μg、山柰素0.003μg、异鼠李素0.005μg。 本方法的最佳线性范围为0.1－1.0μg。 2. 方法原理 试样经提取、水解等前处理后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，测定试样中甙元槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。 3. 试剂 实验用水为去离子水。 3.1 甲醇：色谱纯。 3.2 高效液相色谱流动相：甲醇＋水(50＋50)（以磷酸调节pH＝2.5）。 3.3 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品：含量大于98％（HPLC）。 3.4 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准溶液的配制 分别准确称取100mg槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品于100mL容量瓶中，加入甲醇溶解后，定容至刻度，此溶液浓度为1.0mg/mL，将该液稀释成10 ~ 100mg/L的标准系列溶液. 4. 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2 水浴锅。 4.3 超声波清洗器。 4.4 离心机。 5. 分析步骤 5.1 试样处理：取试样适量，用20mL甲醇于超声波浴中提取30分钟，过滤后滤液加入20mL 1.5mol/L盐酸于水浴上回流水解3小时，冷却后用甲醇定容至50mL，该样液过0.5μm膜，滤液进HPLC分析。 5.2 测定： 5.2.1 液相色谱参考条件 5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5μm, 100?, 3.9mm ID × 150mm 5.2.1.2 紫外检测器：检测波长 360nm 5.2.1.3 流速：1.0mL/min 5.2.1.4 柱温：室温 5.3.1 色谱分析 取10μL标准溶液及试样提取液进高效液相色谱分析，以保留时间定性，用峰面积以外标法定量计算试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。 分析结果的表述 7.1 计算 试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量： X％ ＝ Q％ + K% + I% 式中：Q%  试样中槲皮素含量； K% 试样中山柰素含量； I％ 试样中异鼠李素含量； 7.2 结果表示：分析结果保留三位有效数字。 色谱图