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（2）His的咪唑基与重氮盐（重氮苯磺酸）的反应 棕红色 附：咪唑基的性质 组氨酸含有咪唑基，它的pK2值为6.0，在生理条件下具有缓冲作用。 组氨酸中的咪唑基能够发生多种化学反应。可以与ATP发生磷酰化反应，形成磷酸组氨酸，从而使酶活化。 组氨酸的咪唑基也能发生烷基化反应。生成烷基咪唑衍生物，并引起酶活性的降低或丧失 简述组氨酸的作用 解答：（1）His的咪唑基pK值在氨基酸和多肽链中分别为6.00和7.35，后者接近生理条件。故在生理条件下，咪唑基既可以作为质子受体，又可以作为质子供体，在pH7 附近具有明显的缓冲能力。血红蛋白由于含有较多的His 残基，使其在pH7附近有明显的缓冲能力。 （2） His的咪唑基供出质子或接受质子的速度十分迅速，因而在很多酶的活性中心均有His残基参与 （3）组氨酸中的咪唑基能够发生多种化学反应。可以与ATP发生磷酰化反应，形成磷酸组氨酸，从而使酶活化。 （4）组氨酸的咪唑基也能发生烷基化反应。生成烷基咪唑衍生物，并引起酶活性的降低或丧失 (3) Cys巯基（-SH）参加的反应－－性质很活泼 作用：这些反应可用于巯基的保护。 C6H5CH2Cl A. 在弱碱性条件下，与卤代烃（如苄氯、碘乙酰胺等）反应，生成稳定的烃基衍生物。 作用：与金属离子的螯合性质可用于体内解毒。 B. 与各种金属离子，如对羟基汞苯甲酸，形成稳定程度不同的络合物 作用：氧化还原反应可使蛋白质分子中二硫键形成或 断裂。 胱氨酸 +2H - 2H C. 很容易被氧化形成二硫键（－S－S－） 次磺酸sulfenic 亚磺酸sulfinic 磺酸sulfonic S-nitrosothiol S-nitrothiol （4）羟基参加的反应 作用：可用于修饰蛋白质（酶）。 二异丙基氟磷酸 Ser 和 Thr 的羟基能够与酸作用形成酯。在蛋白质分子中，Ser 常与磷酸结合。 SersSer 是大多数蛋白水解酶活性中心的主要组分，多种酰基化试剂能与酶活性中心的 Ser 羟基作用，导致酶的失活。 Ser （一）电泳分离 举例：Glu、Leu 、His 、Lys，4种混合样，在pH6.0时，泳动方向及相对速度。 Glu Leu His Lys pI 3.22 5.98 7.59 9.74 五、 氨基酸的分析分离 （二）分配层析一般原理 层析即色层分析又称色谱(chromatograph) 固定相(stationary phase) 流动相(mobile phase) 1891年Nerst提出分配定律即： 当一种溶质在两种互不相溶的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比为一常数称为分配系数(Kd) 有效分配系数Keff Keff = 某一物质在动相中的总量 某一物质在静相中的总量 上述逆流分溶的结果可用曲线表示 逆流分溶曲线 管号 各管中溶质的总含量 分溶曲线与转移次数的关系 溶剂系统体积 相对浓度 (二）分配柱层析 可以同检测器、记录仪、馏分收集器、输液泵构成层析系统。 (三)纸层析 Rf主要与R基的极性有关，溶剂的pH可影响R基的极性，氨基酸与滤纸的吸附作用也影响Rf。 纸层析中的Rf值 Rf= X Y 溶剂前沿 氨基酸显色点 滤纸 原点 2. 以正丁醇：乙酸：水体系为溶剂（pH4.5) ，对下列氨基酸进行纸层析分离，指出下列各组中氨基酸的相对移动速度。 Ile, Lys (2) Phe, Ser (3) Ala,Val, Leu (4) Pro, Val (5) Glu, Asp (6) Tyr, Ala, Ser, His 解答：在微酸性条件下，a-NH3+ 和a-COO- 的电荷几乎彼此对消。纸层析的分离是基于氨基酸的非极性性质。 （1） Ile是疏水性强的氨基酸， Lys是带正电荷的极性氨基酸，故移动速度Ile ＞ Lys （2） Phe的非极性大于Ser ，故移动速度Phe ＞ Ser (3) 三种氨基酸中， Leu疏水性最强，Ala疏水性最弱,故移动速度Leu＞ Val＞Ala (4)移动速度 Val ＞ Pro (5) Glu的侧链疏水性大于Asp，故移动速度Glu ＞Asp (6)移动速度 Tyr ＞ Ala ＞ Ser≈His （四）离子交换层析 离子交换树脂的结构如图所示，功能基团种类较多。 氨基酸的离子交换分离原理 若pIpH ，两性离子带净正电荷，若pI pH ，两性离子带净负电荷。差值越大