叶绿素的提取与含量测定.pdfVIP

实验报告 课程名称： 植物生理学实验 指导老师： 成绩： __________________ 实验名称： 叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定 实验类型： 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、 实验目的和要求： 1． 掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定。 2 ． 掌握定量分析的原理和方法。 装 二、 实验内容和原理： 订 以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。原理如下： 1．叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用 95%的乙醇或 80%的丙酮提取。 线 2．皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的 类胡萝卜素分开。 3．取代反应。 在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的 Mg2+,可依次被 H+和 Cu2+取代形成褐色的 去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。 4 ．叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。 5．定量分析。叶绿素吸收红光和蓝紫光，红光区可用于定量分析，其中 645 和 663 用于定量叶绿素 a,b 及总量，而 652 可直接用于总量分析。 三、实验材料与试剂 材料：青菜叶 试剂： KOH 固体、醋酸铜粉末、醋酸 四、主要仪器设备： 1．天平（万分之一） 、可扫描分光光度计、离心机 2 ．研具、 PE 管、酒精灯等 五、操作方法和实验步骤（必填） 1．定性分析： 荧光现象：鲜叶 3-5g+95%乙醇 15ml （逐步加入） , 磨成匀浆 ，过滤入三角瓶，观察荧光现象 皂化反应： 加 KOH数片剧烈摇均，加石油醚 1ml 和 H2 O 1ml ，分层后观察 取代反应：加醋酸约 1ml，观察颜色，取 1/2 加醋酸铜粉，加热变 亮绿 色 2 ．叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定： 皂化反应的上层黄色石油醚溶液（稀释 470nm OD 0.5-1 ） ，在 400-700nm 处扫描光谱，分别测定 类胡萝卜素的吸收峰 反复用石油醚粹取 , 直到无类胡萝卜素 , 离心得叶绿素 ( 盐 ) ，（稀释 663nm OD 0.5-1 ） ，分别测定 叶绿素的吸收峰 3 ．叶绿素定量分析： 鲜叶 0.1g ，加 1.9mlH 2O，磨成匀浆，取 2 份 0.2ml 加 80%丙酮 4.8ml, 摇匀， 4000 转离心 3min, 上 清液在 645 ，652，663 测定 OD，计算 Chla,Chlb 和 Chl 总量的值。 六、实验数据记录和处理 1．荧光现象：透射光 绿 色，反射光 红 光 2．皂化反应： 上层呈 黄 色，为 类胡萝卜素 ，吸收 蓝紫 光。 下层呈 绿 色。为 叶绿素 。吸收 蓝紫光和红 光。 皂化反应分层 3. 类胡萝卜素和叶绿素的吸收光谱测定： 上层黄色溶液扫描光谱 吸收峰为 468nm、439nm、413nm、667nm和 606nm 五个 下层绿色溶液扫描光谱 吸收峰为 414nm、526nm、639nm三个