核酸生物合成.pptxVIP

; ? 中心法则(central dogma) DNA RNA 蛋白质; 复制：以亲代DNA或RNA为模板，根据碱基配对的原则，在一系列酶的作用下，生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。;第1节 DNA的生物合成;三个方面： 1.复制 2.损伤修复 3.逆转录 ;一、参与DNA复制的酶及蛋白因子;三种大肠杆菌DNA聚合酶 1. DNA聚合酶I 3′ 5′外切酶； 5′ 3′聚合酶 5′ 3′外切酶 作用：切除引物、填补空缺、损伤修复;;Large（Klenow）fragment of DNA pol Ⅰ;2. DNA聚合酶Ⅱ 3′ 5′外切酶 5′ 3′聚合酶 作用：DNA损伤修复 3. DNA聚合酶III 大肠杆菌DNA复制的主要酶;Sliding clamp subunits;; 酶; 所有DNA聚合酶都只能在模板链的指令下，在引物（通常RNA）3’-OH添加新核苷酸功能，没有从头合成活力； 引物酶合成一小段RNA，作为DNA合成的引物； 必须与几种辅助蛋白组装成引发体，才有合成引物的活性。 如：DonaB、DonaC、DonaT、PriA、PriB、PriC等;（三）DNA连接酶（DNA ligase);催化二段DNA链之间3’,5’ 磷酸二酯键的形成 ;（四）解螺旋酶;（五）单链结合蛋白（SSB）;（六）拓扑异构酶;第20页/共83页;第21页/共83页;二、DNA的复制;Old strand;大肠杆菌培养在15N培养基中;DNA复制合成的子代DNA分子中，一条来自亲代DNA分子，另一条是新合成的，所以称为半保留复制。;二、DNA的复制过程;(2)模板DNA解除高级结构 解螺旋酶把双螺旋解开成单链，SSB立即结合单链。拓扑异构酶解开复制叉前方的超缠现象。 （3）RNA引物的形成 由引发酶以单链DNA为模板，按5’→3’合成引物。;DNA双链复制起始点;原核生物 双向复制 （θ型复制） 特定起始点：oriC;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 ;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 ;; 在RNA引物上，由DNA聚合酶Ⅲ催化，在引物3’-OH每掺入一个核苷酸，从底物dNTP切下一个焦磷酸。 体内仅存在5’ → 3’的DNA聚合酶;第35页/共83页;;前导链（leading strand）： DNA复制时，一股以3’ 5’方向的母链作为模板，新合成的链以5’ 3’方向连续合成的链称为前导链。 （复制方向与解链方向一致）;滞后链（lagging strand): DNA复制时，一股以5’ 3’方向的母链作为模板，新合成链沿5’ 3’合成1000-2000个核苷酸不连续的小片段称为滞后链。 （复制方向与解链方向相反) ;? ? DNA半不连续复制： 3’ 5’方向母链为模板，新链5’ 3’方向连续合成5’ 3’方向母链为模板，新链5’ 3’方向合成许多不连续的片段（冈崎片段） 这种复制方式称之为半不连续复制。 ;第40页/共83页;去除RNA引物 补充空缺 连接 ; 严格的碱基配对规律 聚合酶的选择作用 复制时有即时的校读功能 3’ 5’外切酶功能 DNA损伤的修复;四、逆转录作用;逆转录酶性质 ;;自发因素 物理因素 化学因素;2. DNA损伤修复;光复活/光修复 ①光复活酶识别TT→ 与之形成复合物 ②吸收光能 ③使TT解开成为单体 ④酶从复合物中释放 仅作用于UV形成的产物;切除修复发生在复制之前;;第51页/共83页;3、DNA突变;第2节 RNA的生物合成;基因转录:以DNA为模板的RNA聚合酶的催化下，按照碱基配对原则，以四种NTP为原料，合成一条与DNA互补的RNA链的过程。 不对称转录:DNA双链中一条链的某一区段作为模板合成RNA，而另一条链不用于合成RNA。 转录起始于DNA模板的一个特定位点（启动子），并在一定位点终止（终止子），这个转录区域称为转录单位。;在转录中，双股DNA中只有一条链是模板（模板链）（反意义链） （-链） 另一条链为（编码链）（有意义链） （+链）;一、催