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①理化分析法（Ⅳ） 色谱分析法 —HPLC法 （1）RP-HPLC法：适用于肽类、氨基酸、蛋白质和多糖的测定，如生白能的含量测定。 固定相：C8、C18烷基硅烷键合相 流动相：甲醇-水、乙腈-水（甲醇）、乙腈-缓冲液 检测器：紫外、荧光或电化学检测器 （2）高效离子交换色谱法（HPGEC） （3）高效凝胶过滤色谱法（HPGFC） ①理化分析法 —高效毛细管电泳法（HPCE） HPCE是根据带电组分在管中由于其所带电荷和分子量的大小，即荷质比不同产生不同的迁移速度而分离。 在生物药物的分离分析中应用广泛。如氨基酸的分离、蛋白质的分离及其分子量的测定、DNA合成中产物纯度的测定等。 ②生化测定法 酶活力测定法：以酶为分析对象，测定样品中某种酶的活力或活性，并用活性单位（IU）和比活性(1mg酶的活性单位)表示 。 酶分析法：以酶为分析工具或分析试剂，测定样品中酶以外的其它物质的含量。 类型 酶法 一）酶活力测定法 定义： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的测定实际上是测定一个被酶所催化的化学反应的速度─可以用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示。 酶活力测定的目的就是要通过酶反应速率的测定，求得酶的浓度或含量。 一）酶活力测定法 测定方法 取样测定法：将酶与底物混合反应一定时间后，取出一定量反应液停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量，求得单位时间内酶促反应的变化量。如药典收载胃蛋白酶的效价测定 连续测定法：将酶和底物混合后隔一定时间，间断地或连续地测定反应的连续变化。药典中胰蛋白酶的效价测定 二）酶分析法 总变量分析法（平衡法或终点法）： 根据被测物质（底物）的性质，选择适宜的分析工具酶对该物质进行作用，在反应完成后，借助理化方法测出其总变化量，并参考反应的平衡点，计算出被测物的实际含量或浓度。 二）酶分析法 2. 动力学分析法（反应速率法）： 通过条件控制，分别使底物、辅酶活化剂或抑制剂的浓度在酶反应中起决定反应速度的主导作用。则酶的反应速度和上述相应因素的浓度间将具有确定的比例关系，通过测定酶反应速度即可求出它们的浓度。 ③生物检定法 生物检定法是利用药物对生物体（整体动物、离体组织、微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。 应用 1、药物的效价：适用于测定一些采用理化方法不能测定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物。如洋地黄、胰岛素、肝素及各种抗生素。 ③生物检定法 2、微量生理活性物质的测定：一些神经介质，激素等微量生理活性物质，由于其很强的生理活性，在体内浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理化方法测定。而不少活性物质的生物测定法因灵敏度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。 3、体内微量生理活性物质的测定 基因工程药物质量控制（略） END 第十章 生物药物分析 基本要求 1．熟悉生物药物的范围、种类和特点。 2．掌握生物药物质量检验的基本程序与方法类型。 3．了解本类药物含量测定的方法。 事故案例 2008年5月22日至28日，有6名在南昌大学第二附属医院就医的患者，使用江西某制药公司生产的批号静脉注射用人免疫球蛋白（pH4）后死亡。 江西省食品药品监督管理局采取紧急措施，对相关药品和资料进行封存，并责成该企业迅速召回该批次产品。 抽取样品送中国药品生物制品检定所检验，对相关药品和资料进行封存。 一、概述 化学药物 中 药 生物药物 人类用于预防、诊断和治疗疾病的三大类药物 生物药物的定义： 利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用化学、生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大类药物。 1. 生物药物的分类（Ⅰ） 生物药物按来源和生产方法可分为： 生化药物：从动物、植物及微生物等生物体中分离提取的，以及用生物-化学合成、微生物合成或现代生物技术制得的生命基本物质及其衍生物等一类药物。 氨基酸、多肽、蛋白质、酶、多糖、核苷酸类等。 如丙氨酸、硫酸鱼精蛋白、氟尿嘧啶等。 1. 生物药物的分类（Ⅰ） 生物技术药物：应用基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等现代生物技术获得的药物。 生物制品：用微生物、细胞及各种动物和人源的组织和体液等生物材料为原料制备的药物。 细菌类疫苗、病毒类疫苗、抗毒素及抗血清、生长因子、单克隆抗体等 人干扰素、人白细胞介素、促红细胞生成素、重组融合蛋白等 1. 生物药物的分类（Ⅱ） 按化学本质和化学特性可分为： 氨基酸及其衍生物类 蛋氨酸 谷氨酸 丙氨酸 多肽和蛋白质类 催产素 血清白蛋白 胰岛素 酶和辅酶类 胃蛋白酶 门冬酰胺酶 凝血酶 核酸及其降解物和衍生物类