分子克隆的载体.pptVIP

表达载体pET-5a是典型的pET载体，其在载体的基本结构的基础上加入了T7 噬菌体启动子序列及其下游的几个酶切位点。 当外源基因插入到这些酶切位点后，就可在特定的宿主细胞中诱导表达。 (二)利用T7噬菌体启动子的表达载体 T7噬菌体启动子 T7噬菌体启动子只能由T7噬菌体的RNA聚合酶识别并启动转录，因此宿主菌株自身必须能表达T7噬菌体的RNA聚合酶，常见的宿主菌株是BL21(DE3)。 当pET载体进入BL21(DE3)后，lacI基因表达产物抑制T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达，目的基因无法启动表达。当存在IPTG后，使抑制物失去抑制作用，从而可以启动目的基因的表达。 T7噬菌体启动子的表达载体工作原理 用作分离的载体蛋白被称为标签蛋白或标签多肽 (Tag)，常用： 谷胱甘肽转移酶 (glutathione S-transferase, GST) 六聚组氨酸肽 (polyHis-6) 蛋白质A (protein A) 纤维素结合位点 (cellulose binding domain)等。 (三)表达融合蛋白的表达载体 GST表达载体在启动子tac和多克隆位点之间加入了两个与分离纯化有关的编码序列(谷胱甘肽转移酶基因和凝血蛋白酶(Thrombin)切割位点的编码序列)。 当外源基因插入到MCS后，可表达出由三部分序列组成的融合蛋白。 GST是来源于血吸虫的小分子酶