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保健品中叶酸含量检测探究 【摘要】目的本文新建立了一种高效液相色谱 检测保健品中叶酸含量的方法。方法采用乙醇-水为溶剂从 保健品中提取目标物叶酸。采用高效液相色谱法，色谱柱为 AgilentXDB (C18250X4. 6mm, 5 um)不锈钢柱，用乙睛 /10mmol/L庚烷磺酸钠溶液(1%。三氟乙酸)=15/85作流动 相进行洗脱，柱温40°C,流速1. OmL/min,检测波长280nm, 进样量为20pLo结果 叶酸在范围0. 5-lOug/mL与峰面积 线性关系良好，相关系数为0. 99999,平均回收率RSD为 2. 0%0结论此方法专属性强，灵敏度高，回收率高，检测 限低，分析时间短，简便，准确，适用于保健品中叶酸的含 量测定。 【关键词】保健品；叶酸；高效液相色谱；含量检测 doi： 10.3969/j. issn. 1004-7484 (s) .2013.09. 606 文 章编号：1004-7484 (2013) -09-5281-02 叶酸是一种重要的B族维生素，最初从菠菜叶中提取纯 化，故命名为叶酸。叶酸与人体重要的生化过程密切相关， 直接影响核酸的合成及氨基酸代谢，对细胞分裂、增殖和组 织生长具有极其重要的作用。目前检测叶酸的方法多种多 样，本实验旨在探索出一种简便，准确的方法适合叶酸含量 测定的批量实验。 1材料仪器和试剂 1仪器高效液相色谱仪（Agilentl260）配紫外检测; 水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司）；超纯水系统；电子 天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。 1.2试剂水，乙醇，叶酸标准品，乙月青（色谱纯），庚 烷磺酸钠（色谱纯），三氟乙酸。注：水为超纯水，除特别 说明外，其他试剂均为分析纯。 2试剂配制 1溶液配置 2. 1. 1标准品溶液的制备 精密称取叶酸标准品 5. OOOOmg,置50mL量瓶中加30mL水，水浴加热至澄清状， 取出容量瓶趁热加入15mL乙醇，待冷却后，加入乙醇定容, 摇匀。滤过，取续滤液作为标准品储备液。 2. 1.2样品溶液的制备 取10g以上样品，研碎，混匀, 各取0. 5g试样，精确称重，置于12个50mL棕色量瓶中（6 份加标），加入30mL水，水浴加热，待水浴中水沸腾后10 分钟，趁热取出量瓶，各加入15mL乙醇，待冷却后，加入 乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为样品储备液。该试验 需避光操作。 2. 2 10mmol/L庚烷磺酸钠溶液（1%。三氟乙酸）准确量 取2. 02g庚烷磺酸钠至lOOOmL的容量瓶中，加入ImL的三 氟乙酸，并用超纯水稀释并定容至刻度。 2.3标准储备液的配制 准确称取5. OOOOmg的叶酸标准 品到50mL的容量瓶中加入30mL纯水，加热溶解，趁热加入 15mL乙醇,冷却用乙醇定容到刻度。浓度为1 OOug/mLo 2.3. 1准确吸取标准储备液5mL,放入到50mL的容量瓶, 用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为lOng/mLo 2. 3. 2准确吸取标准储备液2. 5mL,放入到50mL的容量 瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为5 P g/mLo 2. 3. 3准确吸取标准储备液1. 25mL,放入到50mL的容 量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为2. 5P g/mLo 2. 3. 4准确吸取标准储备液0. 5mL,放入到50mL的容量 瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为l.Ou g/mLo 2. 3. 5准确吸取标准储备液0. 25mL,放入到50mL的容 量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为0. 5 u g/mLo 3色谱条件 检测波长：280nm；色谱柱：AgilentXDB(C18250X4. 6mm, 5um)；柱温：40°C；流动相：乙M/10mmol/L庚烷磺酸钠溶 液(1%。三氟乙酸)=15/85;流速：1.0mL/min；进样量：20uLo 4实验结果 4. 1色谱系统试验 4. 1. 1叶酸的保留时间和系统评价 取10 u g/mL的标准 工作液20uL进样分析得出叶酸的保留时间为7. 719mino 4. 1.2标准工作曲线 选定的色谱条件下，取标准品溶 液 2. 3. 1、2. 3.2. 2. 3. 3、2. 3. 4、2. 3. 5,进样 20 u L,记 录色谱图，用工作软件绘制出标准工作曲线，得出回归方程、 线性范围、相关系数，以峰面积积分值为纵坐标，以叶酸标 准品进样量(卩g/mL )为横坐标，计算回归方程： Y=52. 531X+0. 140, r=0. 99999,表明叶酸在 0. 5-10 u g/mL 浓度范围内与峰面积的线性关系良好。 4. 2方法最小检出限将10 u g/mL的标准工作液逐级稀 释进样记录图谱，得到信噪比(S/N)为4. 6： 1 03： 1)的