生物化学 淀粉酶水解实验-2016.pdfVIP

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试验一 淀粉酶水解实验 1. 实验目的:观察淀粉酶水解过程中与碘液的显色变化情况 2. 实验时间:2 小时 3. 原理: 淀粉显色原理: 直链淀粉呈现螺旋结构,每个螺旋含6 个葡萄糖残基。碘分子嵌入螺旋中心孔道。借朝 向圈内的羟基氧和碘之间的相互作用形成稳定的淀粉-碘络合物(深蓝色,产生特征性的蓝 色需要约36 个葡萄糖残基,即6 圈)。支链淀粉与碘结合形成的络合物能反射更短波长的光。 因此支链淀粉遇碘呈现紫色到紫红色。 水解过程中,络合物随着淀粉链的缩短对不同纳米光波的反射发生变化,因此出现了从 蓝色→蓝紫色→紫色→红色→无色的颜色变化。 淀粉的糊化:淀粉在常温下不溶于水,但当水温至 53 ℃以上时,淀粉胶束结构全部崩 溃,淀粉分子形成单分子,并为水所包围而成为溶液状态。由于淀粉分子是链状甚至分支状, 彼此牵扯,结果形成具有粘性的糊状溶液,这种现象称为糊化。 4. 试验材料:(共 12 个组) 1. 仪器和设备:天平共6 台、水浴锅6 台、电炉12 台; 2. 淀粉酶溶液6 瓶、可溶性淀粉6 瓶、碘液12 瓶、手套12 付。 3. 玻璃用品:钥匙4 个、250mL 烧杯 12 个、100mL 量筒6 个、玻璃棒12 个、温度 计12 支、1mL 塑料滴管12 支、点滴板24 个。 5. 方法与步骤 1) 称取2.0 ±0.1g 可溶性淀粉,放入250mL 的烧杯中,用量筒加入100mL 自来水, 搅拌溶解。观察淀粉乳的状态。取2 滴淀粉乳,滴入点滴板上(预先滴入2-3 滴碘液),观 察反应后的颜色和状态。 2) 将淀粉乳放在电炉上,边搅拌边加热,充分糊化至透明,放入70 ℃水浴中。 3) 待糊化液温度降至70 ±2 ℃,取2 滴糊化液,滴入点滴板,观察反应后的颜色和状 态。 4) 在糊化液中加入的中温淀粉酶(0.1g /mL)1mL,搅拌均匀,在70 ℃恒温水浴中开 1 始酶解。 5) 0-2 分钟,每20s 取2 滴水解液,滴入点滴板,观察反应后的颜色和状态。 6) 2 分钟之后,每1 分钟取2 滴水解液,滴入点滴板,观察反应后的颜色和状态。 7) 观察反应后的颜色,待碘液不变色时,表明酶解完成。 思考题 1. 淀粉糊化前后发生的变化,为什么? 2. 淀粉悬浊液、淀粉糊化液和淀粉酶水解过程与碘液发生什么不同的显色反应,为什 么? 注意事项:注意安全,吸管禁止倒置。 2

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