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实验9 吲哚乙酸氧化酶活性的测定 P155 实验目的 通过实验掌握测定吲哚乙酸氧化酶活性的方法;加深对体内自由生长素水平调节途径的认识. 实验原理 IAA氧化酶是一种含铁的血红色素蛋白质，参与吲哚乙酸在植物体内的氧化。 在吲哚乙酸氧化酶的作用下，吲哚乙酸受到氧化，生成无生理活性的3－亚甲基羟吲哚终产物。 体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体吲哚乙酸的水平，起着重要作用，而影响植物的生长。 酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 器材与试剂 ◆实验仪器： 离心机、分光光度计、恒温箱、研钵、移液管、容量瓶、试管。 ◆实验试剂： 1mM Mncl2、1mM 2,4-二氯酚、1mM IAA、0.02MpH6.0 PBS、试剂B（10ml 0.5mM Fecl3+500ml 35%过氯酸，用前混合，避光保存） ◆实验材料： 绿豆下胚轴 实验步骤 实验步骤 实验结果计算 1. 依回归方程计算1,2号管被反应的IAA量（μg） Y=315.98A+7.7472 2. 酶活性计算（单位鲜重材料、单位时间内降解IAA的量： μg·gFW-1·h-1） 注意事项 1.低温控制； 2.充分研磨提取； 3.试剂混匀； 4.充分反应。 实验报告（作业） 计算实验结果。 实验中反应及显色步骤为什么要在暗处进行？ 试分析绿豆上胚轴、下胚轴和胚根中该酶活性的大小。 * 自由生长素水平 运输 区域化（液泡？） 生物降解 生物合成 结合 绿豆芽上或下胚轴或胚根1g 0.02M pH6.0 PBS研磨成匀浆 0.02M pH6.0 PBS定容至10ml 4℃,8000rpm 10min 1.酶液提取 2.反应（按下表加入试剂，30℃，暗反应30min） 对 照 10 0 6 2 1 1 3 胚根 10 1 5 2 1 1 2 上胚轴或者下胚轴 10 1 5 2 1 1 1 PBS 1mM IAA 1mM 二氯酚 1mM Mncl2 备注 总体积 (mL) 酶液 (mL) 试剂量（ml） 试管 2ml上述反应液 3.显色 4.比色 试剂B 4ml + 30℃，暗反应30min 分别以试管1或2为对照，于530nm处测定试管3的吸光度值A Y W × 30 60 × 10 * * *
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