实验四 线粒体和液泡系.docVIP

实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察 ? 实 验 目 的 1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。 ? 实 验 原 理 ? 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 ? 实 验 用 品 一、器材 显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、牙签、吸水纸等。 二、试剂 1. Ringer溶液： 2. 1/3000中性红溶液： 称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热 (30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 3. 1/5000詹纳斯绿B溶液 称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 三、材料 人口腔上皮细胞，小麦种子。 ? 实 验 方 法 一、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 用牙签在口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞于 清洁载玻片（涂片） ↓ 滴加1-2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 染色5-8min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 ?二、植物细胞液泡系的超活染色与观察 取小麦的根尖 ↓用刀片纵切根尖 放入中性红染液滴中，染色5min。 ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察) ?实 验 结 果 ?在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。 作 ?????业 1. 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布。 2．绘小麦根尖不同区域液泡的形态与分布。 思 ?考 ?题 ?1. 用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器? 2. 小麦根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅?