基因诊断基因治疗chapter4-2.docVIP

第四章 基因诊断技术与方法（下） 2 聚合酶链反应 1985年由美国Cetus公司的Kary Mullis首创了一种极为简便和快速地能在体外进行扩增DNA的技术，在很短时间内，数量上仅几个拷贝的基因可放大上百万倍，极大地提高了DNA扩增率，这就是聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)，Mullis因此获得了1993年诺贝尔医学奖。现在，PCR已成为基因诊断技术中普遍应用的技术。 2.1 聚合酶链反应的基本原理 PCR实际上是以DNA为模板，在4种核苷酸存在的条件下，借DNA聚合酶的作用而产生的酶促合成反应。PCR反应最重要的组分是引物，也就是从模板DNA双链选取一段特定序列再在体外合成的寡核酸链。PCR之所以能够发生，依赖于在加热条件下，双链DNA解离形成单链（变性），当温度骤然降低（复性）时，在反应环境中的引物能特异地与这些单链相结合，同时使４种核苷酸在DNA聚合酶的作用下，发生以引物为起点从5’→3’端进行聚合的现象，遂使DNA链不断延伸 2.2 聚合酶链反应过程 2.2.1 PCR ① 变性(denaturation)：常规采用94℃，在高温条件下使模板DNA(待扩增DNA)氢键断裂，解链成为单链模板；② 退火(annealing)：人工合成的两个寡聚核苷酸引物在较低温度下，分别与单链模板DNA链形成杂交链；③ 延伸(