黄酮类化合物提取与分离.pptVIP

（二）黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV特征 Benzoyl(苯甲酰基) cinnamoyl(桂皮酰基) (峰带II，220-280nm) （峰带I，300-400nm） 反映A环取代情况 反映B环取代情况 1、黄酮与黄酮醇类： ① 在200-400 nm之间都出现两个吸收峰， 二者峰形相似，但带Ⅰ位置不同，据此分类。 ② 在黄酮及黄酮醇母核上，如7-及4 ′位引 入羟基、甲氧基等供电子基，将引起相应吸收带红移。 通常，整个母核上氧取代程度越高，带Ⅰ 越向长波方向位移。 ③ 带Ⅱ的峰位主要受A-环氧取代程度的影响； ④ B-环的取代基对带Ⅱ的峰位影响甚微，但可影响它的形状。 ⑤ 如黄酮及黄酮醇母核上的羟基甲基化或苷化时，将引起带Ⅰ位置紫移； 如黄酮及黄酮醇母核上的羟基被乙酰化了，则原来酚羟基对光谱的影响将完全消除。 2、查耳酮及橙酮类 ①共同特征是带Ⅰ很强，为主峰；带Ⅱ较弱，为次强峰。 ②查耳酮中，带Ⅱ位于220～270nm，带Ⅰ位于340～390nm； ◆ 查耳酮中，如在环上引入了氧取代基，也引起带Ⅰ位置红移，尤其2′-位引入-OH时影响最大。 ◆ 查耳酮中，如2′- OH被甲基化或苷化， 则引起带Ⅰ位置紫移。 ③ 橙酮中，常显现3～4个吸收峰，但主要吸收峰（带Ⅰ）一般位于370～430 nm。 ◆? 天然橙酮的带Ⅰ可能出现在370～413 nm。 3、异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇 ① 这三类化合物中，除有由A-环苯甲酰系统引起的带Ⅱ吸收外，因B环不与吡喃酮环上的羰基共轭（或共轭很弱），故带Ⅰ很弱，常在主峰的长波方向处有一肩峰。 ② 根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄酮及二氢黄酮醇类，前者在245～270 nm ，后两者在270～295nm 。 * 第三节 提取与分离 一、提取 1、黄酮苷类与极性较大的苷元(羟基黄酮,双黄酮,橙酮,查耳酮等)——丙酮,乙酸乙酯,乙醇,甲醇,甲醇-水(1:1)等提取 2、多糖苷类: 沸水提取 3、花色苷类: 0.1% 盐酸提取 4、黄酮苷元: 氯仿,乙醚,乙酸乙酯等提取 （一）溶剂萃取法 1、原理：黄酮类化合物与混入杂质极性不同 2、举例： 石油醚 —除叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素； 乙醇 —— 除蛋白质、多糖类等水溶性杂质。 （二）碱提取酸沉淀法 1、原理：黄酮类化合物易溶于碱性水。 2、常用碱液：碳酸钠, 氢氧化钠, 氢氧化钙等 例如：从槐花米提取芦丁过程 槐花米→加6倍量水→煮沸→以石灰乳调 pH=8-9→微沸30min→趁热过滤→残渣再 水煮一次→合并两次滤液→ 60-70℃时以 浓盐酸调节pH=4-5→静置24小时→抽滤 →水洗至中性→ 60℃干燥得粗品芦丁→ 沸水重结晶 →70-80℃干燥得纯品芦丁。 （三）碳粉吸附法 1、适用范围：主要用于苷类的精制。 2、使用过程： ① 植物甲醇粗提物，加入活性炭，检查上清； ② 沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脱； ③ 减压浓缩7%酚/水洗脱液至小体积； ④ 乙醚除去残留的酚 ⑤ 水层中含有较纯的黄酮苷类。 （四）聚酰胺吸附法 1、 聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的 吸附剂 2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水 3、分离效果：粗分 例如：银杏叶黄酮的提取 （五）超临界流体萃取法 1、以CO2为单一流体萃取极性较低的游离黄酮或黄酮的碳苷类； 2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取极性较高的黄酮或黄酮苷类。 例如：从甘草中提取黄酮类化合物，以CO2为单一流体可萃取极性较低的干草查耳酮A、B； 在CO2-水-乙醇溶剂体系中则可提取极性较高的甘草素与异甘草素。 二、分离 （一）柱色谱法 1. 硅胶柱色谱： ① 主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。 ② 在加水去活化后可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。 ③ 硅胶中混存少量金属离子，应预先用浓盐酸处理除去，以免干扰分离效果。 ④ 分离黄酮苷元时，用氯仿-甲醇混合溶剂做移动相； ⑤ 分离黄酮苷时，用氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水做移动相。 2. 聚酰胺柱色谱 ① 可用于分离各种类型的黄酮类化合物， 包括苷与苷元、查耳酮与二氢黄酮等。 ② 分离的机理: 主要为氢键吸附 ，其吸附 强度主要取决于羟基的数目、位置以及溶剂 的影响。 ③ 吸附规律如下: a. 酚羟基数目越多，吸附力越强； b. 如酚羟基所处位置易形成分子内氢键， 则吸附力减小。 c. 分子内芳香程度越高、共轭双键越多， 则吸附力增强。 总之，一般吸附力由大到小的顺序为： 黄酮醇 黄酮 二氢黄酮醇 异黄酮 ④ 洗脱规律如下