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基因操作原理题库 名词解释 同裂酶 isoschizomer：识别相同序列的不同的限制性内切酶。 星性活性 star activity：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊 性称星性活性。 质粒不相容性：2 个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒不相容性，它是指在第二个质粒导入后， 在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。 饱和诱变 saturation mutagenesis：对基因的某一小区域内碱基进行多种形式的置换（在关键位置引入不 同的氨基酸探寻何种替换可以获得最大活性） 定点诱变：利用人工合成的寡聚苷酸，在离体的条件下，制造基因中任何部位的位点特异性突变的技术。 突变抑制基因：某一突变基因的表型效应由于第二个突变基因的出现而恢复正常时，称后一基因为前者 的抑制基因。 融合表达载体：表达载体的多克隆位点上有一段融合表达标签（Tag）,表达产物为融合蛋白（有分 N 端或者 C 端表达），方便后继的纯化步骤或检测。 克隆载体：为“携带”感兴趣的外源 DNA、实现外源 DNA 的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一 些 DNA 分子。 穿梭载体 shuttle vector：含有不同宿主的不同的复制起始点，能在不同的宿主中进行复制增殖，一种克 隆载体, 可在 2 种或多种宿主中克隆,常用于重组 DNA 在 E.coli 中克隆再转到另一种生物(eg.yeast)中表达。 置换载体(replacement vectors)：少数载体分子如噬菌体基因组的中间片段与噬菌体的感染能力和 DNA 复制功能无关，因此这个片段可以用限制酶加以切除，代之以外源 DNA 片段。 ．亲和层析（affinity chromatography）利用共价连接有特异配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能 特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。 ．基因文库(Gene library)：即某种生物类型全部 gene 的以重组体形式存在的集合。将某种生物的总 DNA 酶切，然后连接载体，再转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系 (克隆)，当这些克隆多到可以包括某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。 ．亚基因组文库（subgenomic library）用基因组 DNA 的特定部分所构建的基因文库，可用质粒 DNA，线粒体 DNA，限制性 DNA 片段来构建。可通过 Southern 杂交，用探针找出目标 gene 所在的限制 性片段的大小，然后用相应大小的限制性 DNA 片段构建出 gene 文库。 ．双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和 SDS的组合，即先进行等电 聚焦电泳（按照等电点分离），然后再进行 SDS（按照分子大小分离），经染色得到的电泳图是个 二维分布的蛋白质图。 ．酵母双杂交（Yeast two-hybrid system）是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。反 式转录激活因子，往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域构成，其中有 DNA 结合功能域(BD)和转录激活结构域（AD）。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能，但不能激活转 录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的转录因子活性，使 启动子下游基因得到转录。根据这个特性，将编码 BD 的基因与已知蛋白质Ａ的基因构建在同一个表达载 体 BD-Ａprotein 上，将编码 AD 的基因和蛋白质Ｂ文库的基因构建在 AD-Ｂ表达载体上。同时将上述两 种载体转化改造后的酵母，表达两者的融合蛋白。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时， 功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性 1 菌落，研究活细胞内蛋白质相互作用。 １６．信号标签诱变技术(Signature-Tagged Mutagenesis ,STM)是一种在突变基础上鉴定病原微生物毒力 基因的阴性选择方法。其基本原理是在病原体致病过程相关的毒力基因中插入特异性标签的转座子,产生 的突变体由于毒力基因的插入失活而无法引起病原菌持续性感染,结果导致病原体不能在宿主体内存活下 来。通过突变体库感染宿主,然后对存活下来的突变体进行负筛选就可鉴定出病原体的毒力相关基因。该 方法可以证明微生物在感染过程中可能涉及到的基因,及其基因对微生物在体内的增殖具有重要意义。 １７．反向 PCR 反向 PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段。实验时选择已知序列内 部没有切点的限制性内切酶对该段 DNA 进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，