《酶工程》第2章微生物发酵产酶.ppt

细菌乳糖操纵子的作用机制(降解物阻遏) 调节基因 启动子 操 纵 基因 lacZ lacY lacA CAP cAMP CAP-cAMP 复合物 mRNA 当葡萄糖作唯一碳源时，葡萄糖的降解物对腺苷酸环化酶有抑制作用，则cAMP的浓度降低， CAP-cAMP复合物减少，不能与启动子结合，故转录不得进行。 + ?-半乳糖苷酶 ?-半乳糖苷透过酶 ?-半乳糖苷乙酰 基转移酶酶 过去称葡萄糖效应 本节 目录 调节基因 操纵基因 结构基因 mRNA 酶蛋白 阻遏蛋白不能与操纵基因结合， 结构基因表达 调节基因 操纵基因 结构基因 辅阻遏物trp 代谢产物与阻遏蛋白结 合，使之构象发生变化 与操纵基因结合，结构基因不能表达 色氨酸操纵子（酶的阻遏） 阻遏物和操纵基因的调节 * * * 解释土壤是最丰富的菌体资源库、极端环境：极端微生物：嗜冷微生物、嗜热微生物。发现新酶的可能性较大。 * 加上教案上的说明。 * * 分类学上属于藻状菌纲，毛霉目，根霉属。 根霉因有假根（Rhizoid）而得名（假根的功能是在培养基上固着，并吸收营养）。 * 一般都在40－60，对温度不敏感的，可达到100度 * 大多数的报道集中在改善特殊的蛋白酶的性能。定向化技术已经用于酶的改造。诱变枯草芽孢杆菌的基因，酶的产量提高了五倍。 * * * * * 解释一下每一种方法。 * * 因为酶主要是蛋白类酶和核酸类酶 →酶的生物合成主要是指细胞内RNA和蛋白质的合成过程 合成过程: 酶的基因（DNA）→（转录）→RNA →（翻译）→多肽链→（加工、组装）蛋白质 * 同时诱导、顺序诱导 2.2.4 提高酶产量的措施 （1）添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵过程中某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。 乳糖诱导β-半乳糖苷酶 纤维二糖诱导纤维素酶 诱导物一般可以分为3类 酶的作用底物——纤维二糖 酶的催化反应产物——半乳糖醛酸 作用底物的类似物——IPTG （2）控制阻遏物的浓度 为了减少或者解除分解代谢物阻遏作用，应当控制培养基中葡萄糖等容易利用的碳源的浓度。 采用其他较难利用的碳源，如淀粉等 采用补料、分次流加碳源 添加一定量的环腺苷酸（cAMP） 对于受代谢途径末端产物阻遏的酶，可以通过控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。 （3）添加表面活性剂 表面活性剂可以与细胞膜相互作用，增加细胞的透过性，有利于胞外酶的分泌，从而提高酶的产量。 将适量的非离子型表面活性剂，如吐温（Tween）、特里顿(Triton)等添加到培养基中，可以加速胞外酶的分泌，而使酶的产量增加。 由于离子型表面活性剂对细胞有毒害作用，对细胞的毒性较大，不能在酶的发酵生产中添加到培养基中。 （4）添加产酶促进剂 产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。 植酸钙镁，可使霉菌蛋白酶或者桔青霉磷酸二酯酶的产量提高1～20倍； 聚乙烯醇可以提高糖化酶的产量。 产酶促进剂对不同细胞、不同酶的作用效果各不相同，现在还没有规律可循，要通过试验确定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。 微生物发酵生产法中尚待解决的问题 消除毒性 优良产酶菌种的筛选、培育 回本节 2.3 酶生产过程的动力学 2.3.1 酶生物合成的模式 2.3.2 酶生产过程中细胞生长动力学 2.3.3 酶生产过程中产酶动力学 2.3.1 酶生物合成的模式 通过分析比较细胞生长与酶产生的关系, 可以把酶生物合成的模式分为4种类型。即同步合成型，延续合成型，中期合成型和滞后合成型。 同步合成型（生长偶联型） 酶的生物合成与细胞生长同步进行。大部分组成酶、部分诱导酶按照此种模式进行生物合成。 例如米曲霉在含有单宁或者没食子酸的培养基中生长，在单宁或没食子酸的诱导作用下，合成单宁酶（Tanase EC3.1.1.20）。 细胞 浓度 mg/ml 酶 浓度 U/ml 总细胞浓度 活细胞浓度 胞外酶浓度 胞内酶浓度 延续合成型 酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成一段较长时间。属于该类型的酶可以是组成酶，也可以是诱导酶。 例如， 在黑曲霉在以半乳糖醛酸或果胶为单一碳源的培养基中培养，可以诱导聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase，EC3.2.1.15）的生物合成。 酶 浓度 U/ml 细胞 浓度 mg/ml 以半乳糖醛酸为诱导物 以含有葡萄糖的果胶为诱导物 细胞 浓度 mg/ml 酶 浓度 U/ml 中期合成型 该类型的酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞