《生物反应工程》第4章固定化酶.ppt

固定化酶的多酶反应器分解葡萄糖示意图 3、 固定化酶在分离提纯上的应用 生物体内的生物高分子和小分子配基之间（如酶蛋白分子与辅酶之间，酶蛋白分子与抑制剂分子之间，抗体分子和抗原分子之间等）都有一定的亲和力，从而能形成络合物，这些络合物也能在一定的条件分离。利用这种性质，把构成络合双方的任何一方加以固定化，并装成层析柱，就能从溶液中专一地分离提纯构成络合物的另一成分。又固定化酶发展起来的分离技术统称为亲和层析技术。 固定化细胞(Immobilized cells) 直接把微生物细胞固定化。 （1）固定化细胞的依据 ①广义上讲微生物细胞所具有的酶系相当于被一层层 具有选择透过性的细胞膜和质膜所包埋，这些酶本身 就是固定化酶。 ②设法除去细胞特有的对细胞本身起自溶作用的酶系统， 并防止外来细胞对它的侵袭，就能使此细胞反复使用。 （1）固定化细胞的依据 ③细胞膜具有选择性，它往往阻止人们因生产某种产品所加特定底物的进入，这是细胞固定化要考虑的问题。 ④微生物细胞具有维持其生命活动的完整的酶系统，在制备固定化菌体细胞的过程中应尽可能完整地保持细胞的这种特定状态。 （2）制备固定化细胞的方法 已经使用的固定化方法种类繁多，千变万化，新的方法也不断涌现。一般认为，理想的固定化细胞的制备方法，应该具有如下特点： 1）应该能够控制固定化细胞的大小和孔隙度； 2）固定化所使用的原料应该便宜、易得，固定化成本尽量低； 3) 固定化方法简单、易行，固定化过程应尽可能温和，尽量少损伤细胞； 4) 固定化细胞应具有稳定的网状结构，在所使用的pH值和温度下，不会被破坏； 5) 固定化细胞应具有良好的机械稳定性和化学稳定性； 6) 载体对细胞应该是惰性的，即不损伤细胞； 7) 固定化细胞应该使底物、产物和其他代谢产物能自由扩散； 8) 单位体积的固定化细胞应该拥有尽可能多的细胞。 （3）固定化细胞的性质 与固定化酶和游离的细胞比较 a.既不把酶从微生物抽提出来，也不对其进行提纯处理； b.固定化细胞可以消除酶所固有的不稳定性带来的困难； c.使用固定化细胞，可获得较高的酶稳定性； d.使用固定化细胞，有利于反应的连续化； e.当产物的生物合成并非与菌体生长有关时（如抗生素发酵），只要提供所要产物必需的前提物质 （4）固定化细胞的生理学特性 固定化细胞的一个最明显和最重要的生理学特性，是细胞的生理状态，即是否具有生理活力。如图所示： 适用于多酶反应，特别是需要辅酶的反应 适用于一种酶催 化的反应 用于由一种辅酶或少数几种酶催化的反应 （5）固定化细胞的应用 生产L-氨基酸、L-苹果酸 生产果葡糖浆 生产6-APA和抗生素 生产淀粉酶 Immobilized Enzyme Kinetics Bioreactor kinetics Intrinsic kinetics (本征反应动力学) Mass transfer of substrate and product Illustration of Mass Transport and Chemical Reaction Interactions in a Symmetric Slab of Immobilized Enzyme. PHENOMENA PARAMETERS Bulk Fluid Stagnant Film or Boundary Layer Immobilized Enzyme Slab Surface of immobilized enzyme Bulk solution Mass transfer coefficient (kS, kP) Effective diffusion coefficient (DES, DEP) CONCENTRATION PROFILE Catalyst thickness 2L Substrate diffusion into permeable catalyst Diffusion Effects in Surface-Bound Enzymes on Nonporous Support Materials Non-porous Solid Support Film thickness The flux mass-transfer rate JS (mol/L·s) of the substrate from the bulk fluid to the interface, At steady state, the substrate cannot accumulate at the catalyst interface, Define the Damkohler number: [Ss] [Sb] bulk substrate