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第七章 色谱 （下） 一、 名词解释 凝胶过滤色谱：凝胶过滤色谱利用凝胶粒子（通常称为凝胶过滤介质）为固定相，是根据料液中溶质相 对分子质量的差别进行分离的液相色谱法。 溶胀率：干燥凝胶颗粒使用前要用水溶液进行溶胀处理，溶胀后每克干凝胶所吸收的水分的百分数成为 溶胀率。即溶胀率=100%×（ 溶胀处理平衡后重量-干燥重量）/干燥重量。 床体积：凝胶干粉的窗体积是指 1g 干胶粉充分溶胀后所占有的体积。可用于估算装满一定体积的色谱 柱所需的凝胶干粉量。 排阻极限：凝胶过滤介质的排阻极限是指不能扩散到凝胶网络内部的最小分子的相对分子质量。 分级范围：即能为凝胶阻滞并且相互之间可以得到分离的溶质的相对分子质量范围。 离子交换色谱：离子交换色谱利用离子交换剂为固定相，是根据荷电介质与离子交换剂之间静电相互作 用力的差别进行溶质分离的洗脱色谱法。 反相色谱：利用表面非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，是根据溶质极性 （疏水性）的差别进行分离纯化的洗脱色谱法。 ODS 柱：一种常用的 反相色谱柱。固定相，常用十八烷基(ODS)键合相，因此称为 ODS 柱 也叫 C18 柱。它是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强 的适应能力。 疏水作用色谱：利用表面偶联弱疏水性集团（疏水性配基）的疏水性吸附剂为固定相，是根据蛋白质与 疏水性吸附剂之间的弱疏水性相互作用的差别进行蛋白质类生物大分子分离纯化的洗脱色谱法。 疏水性吸附剂：各种凝胶过滤介质经偶联疏水性配基后均可用作疏水性吸附剂。 亲和色谱：是利用亲和吸附作用分离纯化生物物质的液相色谱法。亲和色谱的固定相是键合亲和配基的 亲和吸附介质（亲和吸附剂）。 亲和吸附剂：将亲和配基共价偶联在固体粒子（配基的载体）的表面（孔内）即可制备亲和吸附剂。亲 和吸附剂又称亲和载体。 二、填空题 凝胶色谱是以__________的__________结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的____________进行 分离的一种色谱分离技术。 凝胶色谱按其流动相的不同分为____________和__________________。 凝胶色谱柱的总体积分为 3 个部分，即为____________、_____________和____________。在凝胶色 谱中，分配系数 Kd 表示 ，Kd=1 意味着 ，Kd=0 意味着 ，0Kd1 意味着 。 4. 凝胶一般为球形，其 对分离度有重要影响。其越小，HETP ，分离效率 。 5. 凝胶过滤色谱的主要用途有____________、_____________和____________。 凝胶色谱柱的外水体积可以用 凝胶过滤色谱常用的凝胶有 来测定。 和 。 8. GFC 一般采用 方式进行洗脱展开，这种洗脱法称 。 m ( I ) ?I洗脱操作。AB?m? m ( I ) ? I 洗脱操作。A B ?m ? 9. 离子交换色谱是以 为固定相，根据_____________________而进行分离的一种色谱分离技 术。适合于____________________物质的分离。 10. 在离子交换色谱中，线性梯度洗脱过程中，流动相的离子强度线性增大，因此溶质的分配系数 _________，移动速度__________。 11. 在 IEC 中多采用 洗脱和 12. 在离子交换色谱中，分配系数与离子强度关系为 ，B 为溶质的 和离子交换基团的 的比值，由于蛋白质等生物大分子为多价电解质，在 pH 值偏离等电点的溶液中 B 值比较 。 13. 在同一离子强度下，不同蛋白质的  可相差非常 ，因此，离子色谱多采用 离子强度 的 洗脱法，或离子强度 的 洗脱法。 14. 反相色谱是利用 为固定相， 为流动相，是根据 进行分离的洗脱色 谱法。 15. RPC 固定相表面完全被___ ____基团所覆盖，表现强烈的_________,因此，必须采用______有机 溶剂（如甲醇、乙腈等）或_________进行溶质的洗脱分离。 16. RPC 主要用于相对分子质量低于_________，特别是________以下的 和纯化。 小分子物质的分析 溶质在反向介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越_______。 反相色谱中流动相的极性越大，洗脱能力_________，溶质的分配系数______ __。通常采用 流动极性，也即是 有机溶剂比例的梯度洗脱方式。 19. 反相色谱中，硅烷化反应的转化率只能达到约 ，一般应用于弱极性到 分离和纯化。 的小分子物质的 反相色谱中，最常用的反相介质为 反相色谱用于的蛋白质分离时，其固定相要采用 。 和 。 基质，流