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现代生物科技
1.(10分)(2019·石家庄市高三二模)乙型肝炎病毒(HBV)可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病,乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系,图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白的流程图。回答下列问题:
(1)利用PCR技术扩增图1中HBx基因时,在第________次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶,两种酶作用于________(填“相同”或“不相同”)的化学键。
(2)基因表达载体导入受精卵常用________法,检测HBx基因是否转录出mRNA时,需要用________做探针,再与相应的物质杂交。
(3)④过程体外受精前需要对精子进行________处理,卵母细胞需要发育到________期,才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过________处理的受体仓鼠子宫内。
(4)在⑤步骤操作前对胚胎进行了检查和筛选,发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡,外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是_____________
____________________________________________________。
2.(10分)(2018·海南高考)甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。为了改善黄瓜的品质,科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞,得到了转基因植株。回答下列问题:
(1)用农杆菌感染时,应优先选用黄瓜________(填“受伤的” 或 “完好的”)叶片与含重组质粒的农杆菌共同培养,选用这种叶片的理由是____________________________________________。
(2)若在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白,则表明该重组质粒中________已转移到植物细胞中且能够表达;用该转基因黄瓜的某一植株与一株非转基因植株杂交,发现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为1∶1,则说明甜蛋白基因已经整合到________(填 “核基因组”“线粒体基因组” 或 “叶绿体基因组”)中。
(3)假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产,若要以该转基因作物为材料获得脱毒苗,应选用________作为外植体进行组织培养。
(4)通常,基因工程操作主要有 4 个步骤,即目的基因的获取、重组表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。因此,基因工程的含义可概括为____________________。
3.(16分)(2018·全国卷Ⅱ)某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因(简称为甲),并将其插入质粒P0,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切位点的示意图如下,图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
回答下列问题:
(1)据图推断,该团队在将甲插入质粒P0时,使用了两种限制酶,这两种酶是________。使用这两种酶进行酶切是为了保证________,也是为了保证________________。
(2)将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后,若在该细胞中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和________过程。
(3)为了获得含有甲的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的________移入牛的______________中、体外培养、胚胎移植等。
(4)为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方法进行鉴定,在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的________(填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”)作为PCR模板。
4.(10分)(2019·广东省实验中学高二联考)CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分,引导RNA能识别并结合特定的DNA序列,从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA,最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑,请回答下列问题:
(1)研究发现,CRISPR/Cas9仅存在于原核生物,故需借助________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与________酶的功能相似。
(2)首先依据________的部分序列设计DNA片段A(负责编码相应引导RNA),再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接,以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体(如图所示)。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示________酶切位点。
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