微生物检验实验室克雷伯标准操作规程.doc

微生物检验实验室克雷伯标准操作规程 1.概述 克雷伯菌属包括5个种，即肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、解鸟氨酸克雷伯菌、土生克雷伯菌和植生克雷伯菌。而肺炎克雷伯菌又分为3个亚种，即肺炎克雷伯菌肺炎亚种、肺炎克雷伯菌臭鼻亚种及肺炎克雷伯菌鼻硬结亚种。肺炎克雷伯菌肺炎亚种是本菌属最为重要的菌种。 2.标本类型 痰液、脑脊液、穿刺液、脓液、血液等标本。 3.鉴定 3.1 形态与染色：革兰阴性杆菌，大小为（0.3~1.5um）×（0.6~6um）。单个、成双或短链排列。痰标本直接涂片染色，菌体呈卵圆形或球杆状，单个或成双排列。荚膜染色外周可见透明、环状荚膜。 3.2 培养特性 在血琼脂平板上形成较大、圆形、凸起、灰白色、不溶血的菌落；在麦康凯琼脂平板上形成隆起、大而粘液样、易融合的、粉红色菌落，用接种环挑取呈丝状粘连；在中国蓝琼脂平板上呈蓝色菌落；在XLD琼脂平板上呈粘液黄色菌落；在CHROMagar定位培养基上呈蓝灰色菌落。 3.3 生化反应 氧化酶试验阴性，TSI为A/A；发酵葡萄糖等，产酸产气；IMViC--++，动力、H2S、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶试验均阴性，尿素酶、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌特征：琼脂平板上菌落较大、隆起、粘液样，用接种环挑取呈丝状粘连；发酵葡萄糖等多种糖；IMViC--++，动力试验阴性，尿素酶、赖氨酸脱羧酶试验阳性。 3.4.2 本菌属各菌种间的鉴别：见表5-41。 ? 表5-41 克雷伯菌属各菌种间的鉴别 生化反应 肺炎克雷伯菌 产酸克雷伯菌 解鸟氨酸克雷伯菌 植生克雷伯菌 臭鼻克雷伯菌 鼻硬结克雷伯菌 土生克雷伯菌 吲哚 0 99 100 0 0 0 0 甲基红 10 20 96 98 100 100 60 V-P 98 95 95 98 0 0 100 枸橼酸盐 98 95 100 30 0 0 40 尿素酶 95 90 90 98 10 0 0 ONPG 99 100 100 80 0 0 100 丙二酸盐 93 98 100 3 95 100 100 粘液酸盐 90 93 96 100 25 0 100 葡萄糖产气 97 97 96 100 50 0 80 乳糖 98 100 100 100 30 0 100 鸟氨酸 0 0 100 0 3 0 20 41℃ 生长 生长 生长 生长 生长 生长 不生长 3.5操作步骤 3.5.1 氧化酶试验 参见 氧化酶试验标准操作规程 。 3.5.2 从麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。 4.药敏 参见 药物敏感性试验标准操作规程 及CLSI M100-S20最新版本文件。 5.质量控制 参见 质量管理程序 。 6.检验结果解释与分析 肺炎克雷伯菌可产生ESBLs，产酶株对青霉素类、头孢菌素类或单酰胺类耐药。如果检出产ESBLs肺炎克雷伯菌，即使体外药敏试验对青霉素类、头孢菌素类或氨曲南敏感，也应报告对其耐药。但对头霉素、部分加酶抑制剂的复合抗菌药物和碳青酶烯类抗菌药物敏感。 7.临床意义 肺炎克雷伯菌广泛分布于自然界水和土壤中，是人类呼吸道的常居菌，在人和动物肠道内也常见，是常见的条件致病菌，可引起肺炎、脑膜炎、腹膜炎、泌尿系统感染、败血症等疾病。约30%的肺炎克雷伯菌可产生ESBLS，应引起重视。 尿、痰、血液等氧化酶- 尿、痰、血液等 氧化酶- 麦康凯琼脂平板呈黏液、粉红色菌落 克雷伯菌属 仪器或手工鉴定 参考文献 [1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2008 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：