（优质医学）高效液相色谱法原理及其应用.pptVIP

3。使用的流动相应与仪器系统的原保存溶剂能互溶。 * * * * * * * * * * 储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂，流动相进入高压泵之前必须脱气。常用第四种。 * 储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂 * * 虽然流动相是影响组分的保留值的一个重要因素，但是保留值的大小的决定因素是组分与流动相和固定相分子间的作用力…… * 高压输液泵按性能可以分为两类，第一种是恒流泵， * * 按性能分类的第二种是：恒压泵 * * * * * * * * 通常是在实验结束后，到关机之前有两个小时的时间用来冲洗整个仪器管路系统。 * 它可以通过仪器编程，用色谱工作站来控制自动进样器的工作，实现自动进样。进样重复性高，适合大量样品的分析，节省人力。 * 为了延长色谱柱的使用寿命，保证保留值与分离度的重现性，在使用色谱柱的过程中应对色谱柱进行维护与保养 * 长时间连续地使用色谱柱，可能有强滞留组分附着于填料上，引起保留值变化、柱效下降，可用冲洗的方法对柱进行再生。 * 长时间连续地使用色谱柱，可能有强滞留组分附着于填料上，引起保留值变化、柱效下降，可用冲洗的方法对柱进行再生。 * * * 噪声低、基线漂移小、灵敏度高、线性范围宽、重复性好是对检测器的一般要求。 * 紫外检测器的使用率占70%左右。 * 紫外检测器的使用率占70%左右。 * 二、分类 ※通用型：示差折光检测器（DRID）、安培检测器（AD）、蒸发光散射检测器（ELSD） ※专属型：紫外检测器（UVD）、可变紫外可见光检测器（DAD）、荧光检测器（FD） * 三、检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）重复性 * 四、紫外检测器 1．固定波长紫外吸收检测器 2．可变波长紫外吸收检测器 3．光二极管阵列检测器 只能检测有紫外吸收的物质，工作原理基于Lambert-Beer定律。 * 五、可变波长紫外检测器 是目前配置最多的检测器，可根据组分的最大吸收波长来设定检测波长。 * 高效液相色谱仪的使用及维护 使用HPLC级试剂和流动相 清洁的仪器、流动相和样品，如果必要，进行过滤 保证溶剂的相溶性 如果必要，冲洗整个系统，去掉盐，防止污染 在规定的pH范围内选用流动相 对仪器的使用、维护和保养进行记录 * 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤 通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相色谱分析方法必须解决以下问题： ①根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。 ②选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和所选用固定相（粒径及孔径）。 * ③选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式。 ④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。 * 第三节 高效液相色谱法应用示例 盐酸左氧氟沙星滴眼液（5ml:15mg）含量测定 测定方法：色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2）—乙腈（85:15）为流动相；检测波长为294nm。 * 称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.12mg、环丙沙星和杂质E各6μg的混合溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间约为15分钟。左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5。 * 供试品溶液的制备与测定 精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称左氧氟沙星对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含左氧氟沙星0.12mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出供试品中C18H20FN3O4的含量，即得。本品含盐酸左氧氟沙星以左氧氟沙星（C18H20FN3O4）计，应为标示量的92.0%～108.0%。 *