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DNA 甲基化 叶睿 1 DNA甲基化 基本原理 DNA甲基化作为DNA序列的修饰方式，是一种重要的表观遗传机制，能够在不改变DNA分子一级结构的情况下调节基因组的功能，在生命活动中起着重要的作用。 在DNA甲基转移酶(Dnmt)的催化下，以S一腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，将甲基转移到DNA分子中特定碱基上的过程，最常见的是在胞嘧啶上形成5 ’甲基胞嘧啶。 2 3 DNA甲基化和CpG Islands DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。 CpG岛通常位于基因的启动子区或是第一个外显子区，是鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区，只有CpG岛的胞嘧啶能够被甲基化。 CpG岛中的CpG位点通常是处于非甲基化状态，而在CpG岛外的CpG位点则通常是甲基化的。 近来研究发现DNA甲基化还发生在基因转录起始点上游2 kb左右称为“CpG岛岸”（CpG island shore）的区域，绝大部分组织特异性的DNA甲基化发生在“CpG岛岸”而非“CpG岛”区域。 4 5 DNA甲基化与基因印记 基因印迹指在配子或合子发生期间，来自亲本的等位基因或染色体在发育过程中产生专一性的加工修饰，从而导致后代体细胞中两个亲本来源的等位基因有不同的表达活性。 基因组印迹的分子机理与印迹基因中胞嘧啶甲基化尤其是CpG岛的甲基化密切相关。 若基因印迹作用丧失，本应处于“关闭”状态的基因被错误激活开启，导致疾病。 6 DNA甲基化表观遗传机制  基因启动子区内CpG位点的甲基化可能通过3种方式影响该基因转录活性： ①DNA序列甲基化直接阻碍转录因子的结合 ②甲基CpG结合蛋白(MBPs)结合到甲基化CpG位点，与其他转录复合抑制因子相互作用或招募组蛋白修饰酶改变染色质结构 ③染色质结构的凝集阻碍转录因子与其调控序列的结合。 7 直接阻碍转录因子的结合 Ap-2、c-myc、myn、细胞AMP依赖活性因子CREB、E2F、 NF-KB ，所识别序列都含有CpG残基，这些部位一旦被甲基化，转录因子便不能再与此部位结合。 8 甲基CpG结合蛋白与转录抑制 MBPs能特异性结合甲基化CpG位点。MBPs包括MBD(methyl-CpG-binding domain)家族，MBD家族包括MBDl、MBD2、MBD3与MBD4。 MBDs往往以蛋白复合体的形式发挥作用。 抑制因子MeCP1(methyl cytosine binding protein1)与MeCP2_2 可以结合一些甲基化CpG残基。MeCP1可结合含有多重对称性甲 基化CpG位点的DNA，不结合半甲基化CpG位点。 9 DNA甲基化通过改变染色质结构抑制转录 现DNA序列的甲基化能够指导核心组蛋白H3H4的修饰以及连接组蛋白H1之间的连接作用，组蛋白H3与H4氨基端结构域中多个赖氨酸残基被乙酰化后，将会降低整个核小体对DNA的亲和力，还可以阻止或降低与转录或其调节有关蛋白质的相互作用。 因此，甲基化可以通过染色质结构的改变阻断转录因子的通路使其处于稳定失活状态。 10 DNA甲基化参与肿瘤的机制 当肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，而CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，以致于染色体螺旋程度增加及抑癌基因表达的丢失。 11 DNA甲基化与肺癌的早期诊断 于DNA甲基化出现在几乎所有肿瘤中，并且发生在癌前病变和癌变早期，因此是肿瘤早期诊断的理想标志物。 DNA甲基化改变常发生于肿瘤形成过程，包括全基因组水平DNA低甲基化和CpG岛高甲基化。 抑癌基因的失活是肿瘤发生的重要分子基础。 12 Tumor suppressor genes correlated with NSCLC 1. p16基因 位于人第9条染色体p21区，参与细胞周期蛋白调控，通过与细胞周期蛋白依赖激酶CDK4及CDK6结合而抑制后者活性，进而抑制细胞增殖，是一种重要的抑癌基因。 p16启动子区5’-CpG岛甲基化是其失活的重要原因，在肺癌发生发展中起重要作用。 13 Tumor suppressor genes correlated with NSCLC 2. RASSF1A Ras相关区域家族1A（RASSF1A）是人类肿瘤中甲基化频率最高的一个抑癌基因，RASSF1A主要参与细胞周期的调节，该基因甲基化与肺癌发生发展及预后关系密切。 14 Tumor suppressor genes correlated with NSCLC 3. CDH1、CDH13 CDH1、CDH13基因均属于钙粘蛋白家族。 CDH1编码的蛋白E-cadherin是一跨膜糖蛋白，在肿瘤侵袭转移方面起重要作用，是公认的浸润转移抑制基因。该基因启动