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DOC格式论文，方便您的复制修改删减 纳米抗体及其应用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】 自然界在骆驼体内存在缺失轻链的重链抗体, 克隆其可变区得到的单域抗体是最小的功能性抗原结合片段 , 相对 分子质量（Mr）仅为15000, 称为纳米抗体, 具有Mr 小、稳定性强、 可溶性好、 易表达, 免疫原性低等特点。这种小型化的基因工程抗 体在基础研究、 开发新药和疾病的诊断和治疗上具有广阔的应用前 景。 【关键词】纳米抗体 重链抗体 VHH 抗体技术已被广泛地应用于疾病的诊断及治疗中 , 新型基因工 程抗体不断出现, 包括嵌合抗体、 人源性抗体等。抗体小型化是抗 体基因工程研究的主要研究方向之一, 如一些单价小分子抗体scFv, 但在稳定性、 表达产量、 蛋白酶抵抗性和聚合性方面仍有待改进。 1989 年, Ward 等研制出由重链可变区（VH）组成的抗原结 合片段, 命名为单域抗体或dAbs。然而, 其抗原亲合力低,易聚合。 1993 年,Hamers-Casterman 等［1］报道骆驼的功能性抗体都由重链 组成, 天然缺失轻链, 即重链抗体（HCAbs）。克隆重链抗体的可变区 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 得到只由一个重链可变区组成的单域抗体称为 VHH 抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody, VHH), 晶体结 构直径2.5 nm、 长4 nm, 因此称为纳米抗体。在这里我们对其独特 的生物物理性质及其应用做一阐述。 1 纳米抗体的结构特征 纳米抗体具有完整的抗原结合片段。骆驼的HCAbs 具有独特 的重链可变区（VHH）,一个铰链区和两个恒定区（CH2 和CH3）。恒定 区 CH1 是与轻链锚定的部位 , 在纳米抗体的基因组中存在 , 但在 mRNA 形成中被剪切掉, 所以纳米抗体缺乏轻链［2］。因此, 纳米抗 体靠仅有的3 个CDRs 就具备了特异的抗原结合能力和高亲合力, 而 普通抗体则需要6 个CDRs。 纳米抗体的晶体和水溶性结构由 2 个β片层组成支架, 类 似普通抗体的VH 免疫球蛋白折叠。纳米抗体的抗原结合环的结构组 成比普通抗体VH 更大, CDR3区也更长。人和小鼠VH 的CDR3 平均长 度分别为12 和9 个氨基酸, 而纳米抗体则为16～18 个氨基酸。纳米 抗体包含了骨架区（framework region, FR）的氨基酸残基, 因此纳 米抗体能补偿抗原结合位点VL 的缺乏。普通抗体的FR2 中,V37, G44, L45 和W47 这4 个氨基酸残基参与VL 的相互作用, 而在纳米抗体中, 这几个氨基酸残基发生了改变, 突变为 F37, E44, R45, G47, 由疏 水性变为亲水性, 使纳米抗体更易于溶解［3］。利用这一特点, 对人 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 源抗体VH 结构域FR2 中的一些氨基酸进行VHH 特征性改造, 即在人 VH 区的44、 45 和47位点氨基酸残基用纳米抗体中相对应的代替, 所 得到的骆驼化单域VH 抗体不仅保持原有抗体的特异性和亲和力, 且 溶解性好、 稳定性好［4］。基因工程化纳米抗体结构的稳定性和可 溶性还与CDR 长度和多样性相关的突变有关。 比较人类VH3 基因序列与骆驼的VHH 胚系基因序列, 发现二 者有高度的同源性。另外, 在小鼠B 或T 细胞缺乏对纳米抗体的免疫 应答。因此, 带有人VHFR2 烙印的纳米抗体的建立可能是获得非免疫 原性纳米抗体的方法。 2 纳米抗体的特性 纳米抗体的单域性质使其较普通抗体具有一些独特的性质。 2.1 容易制造和表达 纳米抗体是Mr 为15000 的单域蛋白。重组 纳米抗体通常在E.coli 中表达量为10 mg/L。从真菌和酵母中能高 水平分泌纳米抗体, 在振荡培养的酵母菌 （saccbaromyces cerevisiae）中产量为100 mg/L, 而10 L 的补料发酵方法能获得大 于1 g/L 的产量。从15 m3 的发酵中可以获得大于1 kg 的纳米抗体 ［5］。