基于PXR_NF-κB信号通路探讨冬凌草甲素对PI-IBS肠道屏障的保护机制.pdfVIP

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表VII 前 言1 第一部分 冬凌草甲素对PI-IBS肠道屏障功能的干预作用4 1 体内探究冬凌草甲素对PI-IBS大鼠肠道屏障功能的保护作用4 1.1 材料与方法4 1.1.1 材料 4 1.1.2 方法5 1.2 结 果 9 1.2.1PI-IBS大鼠模型评价 9 1.2.2 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠药效学探究10 1.2.3 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠肠道通透性的影响 11 1.2.4 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠肠道屏障功能的影响12 2 体外探究冬凌草甲素对细胞屏障功能的干预作用 13 2.1 材料与方法13 2.1.1 材料13 2.1.2 溶液的配制14 2.1.3 方法14 2.2 结 果18 2.2.1 不同浓度冬凌草甲素对Caco-2 的细胞活力检测18 2.2.2LPS诱导Caco-2 细胞屏障损伤模型19 2.2.3 冬凌草甲素对LPS致Caco-2 细胞屏障损伤的保护作用19 3 讨 论 21 4 结 论22 第二部分 冬凌草甲素通过PXR/NF-κB信号通路改善PI-IBS 的分子机制研究23 1 体内探究冬凌草甲素对PI-IBS大鼠中PXR/NF-κB信号通路的影响23 1.1 材料与方法 23 1.1.1 材料23 1.1.2 方法24 1.2 结 果 26 1.2.1 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠结肠组织中PXR 和NF-κB 基因表达量的影响.26 1.2.2 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠结肠组织中PXR和NF-κB蛋白表达水平的影响 27 1.2.3 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠结肠组织中PXR/NF-κB信号通路下游相关基因 表达量的影响28 1.2.4 冬凌草甲素对PI-IBS大鼠结肠组织中PXR 下游相关蛋白表达水平的影响 28 1.2.5 冬凌草甲素对PXR 潜在的激动作用29 （1）冬凌草甲素和PXR 的分子对接分析29 （2）在正常大鼠体内验证冬凌草甲素对PXR 的激动作用29 2 在Caco-2 细胞中探究冬凌草甲素对PXR/NF-κB信号通路的影响31 2.1 材料与方法31 2.1.1 材料31 2.1.2 溶液的配制32 2.1.3 方法32 2.2 结 果 33 2.2.1 冬凌草甲素对Caco-2细胞屏障损伤模型中PXR和NF-κB基因表达量的影 响33 2.2.2 冬凌草甲素对Caco-2细胞屏障损伤模型中PXR/NF-κB信号通路下游相关 基因表达量的影响34 2.2.3 细胞实验验证冬凌草甲素对PXR 的激动作用34 3 讨 论36 4 结 论38 参考文献39 综 述42 致 谢49 个人简历50 山西医科大学 （博）硕士学位论文 基于PXR/NF-κB信号通路探讨冬凌草甲素对PI-IBS肠道屏障 的保护机制 摘 要 目的： 肠道黏膜屏障损伤是炎症后肠易激综合征(PI-IBS)内脏痛敏的关键原因，其具体 发生机制尚不明确，也缺乏特异性的治疗方法。我们前期研究发现冬凌草甲素 （Oridonin，ORI）可以改善PI-IBS 大鼠肠道黏膜屏障损伤并减轻内脏痛敏，其具 体分子机制有待深入研究。近期研究显示PXR/NF-κB 负反馈环可调节肠道黏膜屏 障功能，但冬凌草甲素是否通过该环路调控肠道屏障功能减轻内脏痛敏尚不明确。 本项目拟采用PI-IBS 大鼠模型，考察冬凌草甲素减轻PI-IBS 内脏痛敏的疗效；以 PXR 激动/拮抗PI-IBS 大鼠模型结合肠道屏障功能评价指标，探究冬凌草甲素通过 激动PXR 改善肠道粘膜屏障功能的作用；在过表达/沉默PXR 的细胞中，利用分子 生物学手段，明确冬凌草甲素通过PXR/NF-κB 负反馈环调节Caco-2 细胞屏障功能 的分子机制，研究结果对明确冬凌草甲素