Intermedin对缺氧_复氧诱导的内皮细胞损伤的保护作用及机制研究.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表VI 前 言1 1 材料与方法2 1.1 实验材料2 1.2 实验方法3 1.3 统计学分析9 2 结 果10 2.1 确定细胞H/R 模型的最佳时间 11 2.2IMD 对内皮细胞存活率的影响11 2.3IMD 对内皮细胞凋亡的影响12 2.4 IMD 对内皮细胞功能的影响13 2.5IMD ROS 14 对 含量的影响 3 讨 论16 4 结 论18 参考文献19 综 述21 致 谢30 个人简历31 山西医科大学硕士学位论文 Intermedin对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤的保护 作用及机制研究 摘 要 目的： 抑制急性肾损伤 （AKI）向慢性肾脏病 （CKD）转变是肾脏病领域的研究热点。 PTC AKI CKD 血管内皮细胞损伤导致的肾小管周围毛细血管 （ ）减少在 向 转变中发 挥重要作用，而活性氧族 （ROS）是导致血管内皮细胞损伤的重要机制。我们前期研 intermedin IMD 究显示， （ ）能通过抑制氧化应激减轻急慢性肾损伤，但对血管内皮 细胞的影响尚不清楚。本实验通过建立内皮细胞缺氧/复氧 （H/R）模型观察IMD 对 血管内皮细胞损伤的影响，并通过测定ROS探讨其保护内皮细胞的机制。 方法： 以体外培养的人脐静脉内皮细胞 （HUVECs）为实验对象，通过三气培养箱体外 建立细胞H/R 模型。分为对照组、H/R 模型组、H/R+IMD 组、H/R+抗氧化剂N-乙酰 NAC H/R+IMD+ H O 半胱氨酸 （ ）组、 过氧化氢 （ ）组。用倒置显微镜观察内皮细胞 2 2 的形态；用MTT 比色法检测细胞存活率，观察IMD 对内皮细胞存活率的影响；用蛋 白免疫印迹法 （Westernblot）测定半胱氨酸蛋白酶-3 （caspase-3）活性片断表达，观 IMD DAF-FM-DA NO 察 对内皮细胞凋亡的影响；采用 法测定一氧化氮（ ）荧光强度； ELISA 法检测内皮素-1 （ET-1）、单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1）和血管细胞粘附分 -1 VCAM-1 IMD DHE-ROS ROS 子 （ ），观察 对内皮细胞功能的影响；用 法检测 荧 光强度，评估 IMD 对ROS含量的影响。 结果： 正常形态的HUVECs在显微镜下呈典型铺路石样镶嵌排列。内皮细胞H/R 模型 18h-6h H/R H/R 的最佳时间为 。与对照组相比， 模型组内皮细胞存活率降低，提示 I 山西医科大学硕士学位论文 后可引起内皮细胞损伤；IMD 后内皮细胞存活率增高，与NAC干预结果无明显差异， 表明IMD 可以保护内皮细胞