番茄SlR1-A-like基因的克隆及功能分析.pdfVIP

符 号 说 明 APX: Ascorbate peroxidase, 抗坏血酸氧化酶 AS: Acetosyringone, 乙酰丁香酮 CAT: Catalase, 过氧化氢酶 CTAB: Cetyl trimethyl ammoniu bromide, 十六烷基三甲基溴化铵 DAB: 3, 3-diaminobenzidine, 二氨基联苯胺 ETH: Ethylene, 乙烯 GA: Gibberellin, 赤霉素 GFP: Green fluorescent protein, 绿色荧光蛋白 HR: Hypersensitive response, 植物过敏反应 IAA: Indoleacetic acid, 生长素 MDA: Malondialdehyde, 丙二醛 MeJA: Methyl jasmonate, 茉莉酸甲酯 NBT: Nitroblue tetrazolium, 氯化硝基四氮唑蓝 PEG: Polyethylene glycol, 聚乙二醇 Pn: Net photosynthetic rate, 净光合速率 POD: Peroxidase, 过氧化物酶 ROS: Reactive oxygen species, 活性氧 SA: Salicylic acid, 水杨酸 SOD: Superoxide dismutase, 超氧化物歧化酶 VIGS: Virus induced gene silencing, 病毒诱导的基因沉默 6-BA: 6-Benzyl adenine, 6-苄氨基嘌呤 目录 中文摘要 1 Abstract 3 1 前言 5 1.1 逆境胁迫对植物的影响 5 1.1.1 逆境胁迫对植物生长发育的影响 5 1.1.2 逆境胁迫对植物膜系统的影响 5 1.1.3 逆境胁迫对植物光合作用的影响 6 1.2 植物抵御逆境胁迫的生理基础 7 1.2.1 渗透调节物质 7 1.2.2 抗氧化防御系统 8 1.2.3 激素调节系统 9 1.3 植物抵御逆境胁迫的分子机制 9 1.3.1 信号转导蛋白基因 9 1.3.2 渗透调节物质合成相关基因 10 1.3.3 抗氧化酶合成相关基因 10 1.3.4 其他功能蛋白相关基因 11 1.3.5 转录因子 12 1.4 番茄抗冷和抗病研究进展 13 1.4.1 番茄抗冷研究进展 13 1.4.2 番茄抗病研究进展 13 1.4.3 植物R1-A-like 基因研究进展 14 1.5 本研究的目的意义 15 2 材料与方法 16 2.1 实验材料 16 2.1.1 植物材料 16 2.1.2 材料培养与处理 16 2.1.3 菌株与载体 16 2.1.4 酶与生化试剂 16 2.1.5 实验引物 17 2.2 实验方法 17 2.2.1 植物总RNA 提取 17 2.2.2 cDNA 第一链的合成 18 2.2.3 番茄SlR1-A-like 基因的克隆 19 2.2.4 目的片段的纯化回收 19 2.2.5 目的片段的连接 20 2.2.6 转化大肠杆菌 20 2.2.7 阳性克隆筛选 21 2.2.8 质粒提取 21 2.2.9 酶切鉴定 22 2.2.10 农杆菌LBA 4404 的制备 22 2.2.11 农杆菌的转化 22 2.2.12 SlR1-A-like 蛋白亚细胞定位 23 2.2.13 农杆菌介导的本氏烟草遗传转化 23 2.2.14 转基因植株的鉴定 25 2.2.14.1 转基因植株基因水平的鉴定 25 2.2.14.2 转基因植株转录水平的鉴定 26 2.2.15 致病疫霉的培养及接种 27 2.2.16 病毒介导基因沉默（VIGS ）番茄体系的构建 27 2.2.17 过氧化氢含量测定 28 2.2.18 抗氧化酶活性测定 28 2.2.19 超氧阴离子含量测定 30 2.2.20 丙二醛含量测定 30 2.2.21 脯氨酸含量测定 30 2.2.22 可溶性糖含量测定 30 2.2.23 光合色素含量及光合参数的测定 30 2.2.24 DAB 和NBT 染色 31 2.3 统计分析 31 3 结果与分析 32 3.1 SlR1-A-like 蛋白的生物信息学分析 3