小麦ZCCT2基因表达载体构建与农杆菌转化.pdfVIP

符 号 说 明 缩略词 英文名称 中文名称 ABEs Adenine Base Editors 腺嘌呤碱基编辑器 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 BE Base Editor 单碱基编辑 CBEs Cytosine Baseeditors 胞嘧啶碱基编辑器 CRISPR Clustered Regularly Interspaced Short 成簇有规律的间隔短回文重 Palindromic Repeats 复序列 CTAB Hexadecyl trimethyl Ammonium Bromide 十六烷基三甲基溴化铵 Kan Kanamycin 卡那霉素 PAM 序列 Protospacer-adjacent Motifs 原间隔区邻近基序 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 pre-crRNA Pre-CRISPRRNA RNA 前体 SRSRs Short Regularly Spaced Repeats 规则的短间隔重复 SSNs Sequence Specific Nuclease 序列特异性核酸酶 TALEN Transcription Activator-like Effector 类转录激活因子效应物核酸 Nucleases 酶技术 ZFN Zinc-finger Nucleases 锌指核酸内切酶技术 目 录 中 文 摘 要I Abstract III 1 前言 1 1.1 春化作用 1 1.1.1 春化作用研究历程 1 1.1.2 春化作用中的物质变化 2 1.2 小麦冬春性的鉴定方法 3 1.3 抗寒性与小麦冬春特性的关系 5 1.4 春化相关基因 5 1.4.1 VRN1 6 1.4.2 VRN2 7 1.4.3 VRN3 8 1.4.4 VRN4 8 1.5 基因编辑技术研究进展 9 1.5.1 CRISPR/Cas 系统 9 1.5.2 CRISPR/Cas 系统的作用机制及分类 10 1.5.3 CRISPR/Cas 系统的发展经过 11 1.5.4 基因编辑在小麦中的应用 12 1.6 本研究的意义 13 2 材料与方法 14 2.1 试验材料 14 2.2 试验方法 14 2.2.1 靶点设计 14 2.2.2 构建转基因植物表达载体 15 2.2.3 小麦原生质体的分离及转化 18 2.2.4 EHA105 农杆菌感受态细胞的转化 19 2.2.5 转基因苗鉴定 19 3 结果与分析 21 3.1 ZCCT1 、ZCCT2 基因表达载体构建 21 3.1.1 单靶点敲除载体构建 21 3.1.2 多靶点敲除载体构建 24 3.1.3 过表达载体与沉默载体构建 25 3.2 原生质体验证 27 3.3 转基因植株鉴定及表型分析 28 4 讨论 31 4.1 表达载体的构建 31 4.2 ZCCT2 基因与小麦冬春性的关系 32 5 结论 33 参 考 文 献 35 致 谢 45 山东农业大学硕士专业学位论文