《发酵工程》第3章微生物代谢调节(第2-3节).ppt

例1：在缩酚(depsi)肽抗生素中AA与羟酸连接。 例如，缬氨霉素含有乳酸和2-羟异戊酸(图3- 14.)。 例2：链霉素、诺卡菌素A、杀假丝菌素和新生霉素是由几种不同前体组装的典型抗生素。 ①、链霉素：由N-甲基-L-葡萄糖胺、链霉糖和链霉胍三部分组成。 ②、新生霉素：由新生霉糖、香豆素、对氨基苯甲酸和异戊烯四个部分组成的。 ③、杀假丝菌素：由对氨基苯甲酸与4个丙酸，15个乙酸和一个丁酸单位缩合组装的，并连接上一个罕见的碳霉糖胺。 ④、诺卡菌素：由L-高丝氨酸、修饰过的L-对羟苯甘氨酸、L-Ser和未经修饰的L-对羟苯甘氨酸组成 。 次级代谢物合成酶往往只具有簇的专一性，即对基质分子的某一部分有要求，对分子的其他部分无绝对要求。 （八）、 次级代谢物合成酶的专一性 例如：产黄青霉的青霉素酰基转移酶能催化青霉素N的a-氨基己二酰侧链，使转化为疏水性的酰基侧链。此反应的专一性较高，因它不能酰化7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)，但接受广泛的内源与外源酰基CoA衍生物。 参与初级代谢物和次级代谢物生物合成的基本差别之一在于引物和延长单位的异质性。 例如：如由于缺少高度专一性，乙酰CoA、丙二酰CoA和丙二酰胺CoA可在四环类抗生素合成中作引物。同样，杀假丝菌素合成中几种芳香酰基CoA衍生物也可作引物。 例如：大环内酯生物合成中的延长单位有丙二酸、甲基丙二酸和丁酸。 然而，不是所有参与次级代谢物合成的酶都缺乏基质专一性。有些具有高度专一性。 例1：红霉素合成酶形成红霉内酯糖苷配基时只接受甲基丙二酰CoA作为延长单位，而不用丙二酰CoA单位。杀假丝菌素合成酶总是按既定的顺序聚合适当的前体单位。 通过基因操纵可以改变次级代谢物合成酶的专一性。其突变株常能形成特殊的次级代谢物，形成新的终产物。 第三节 代谢工程 代谢工程(metabolic engineering)是指藉某些特定生化反应的修饰来定向改善细胞的特性或运用重组DNA技术来创造新的化合物。 代谢工程的要素：将分析方法运用于物流的定量化，用分子生物技术来控制物流以实现所需的遗传改造。 3.3 代谢工程 代谢工程所采用的概念来自反应工程和用于生化反应途径分析的热力学。它强调整体的代谢途径而不是个别反应。 代谢工程涉及完整的生物反应网络、途径合成的问题、热力学可行性、途径的物流及其控制。要想提高某一方面的代谢和细胞功能应从整个代谢网络的反应而不是一个个反应去考虑。重点应放在途径物流的放大和重新分配上。 想通过单个酶的超表达来提高代谢途径的物流是行不通的，除非此酶具有高的物流控制系数。假定能成功超表达途径受限制的酶，该酶固然不再受反馈抑制，但瓶颈可能落在途径下游的酶上，从而导致代谢中间体的大幅度的增加。同时和协调地超表达途径中的大多数酶，原则上可大大提高代谢物流而不至于改变各代谢物的浓度。 另一种选择是增加途径产物的需求，这或许可通过提高产物的分泌速率办到。 次级代谢物通常由初级中间体产生，将初级中间体转化为次级终产物有三个生化过程： ①、生物氧化和还原； ②、生物甲基化； ③、生物卤化。 ①、氧化还原反应：一般涉及醇的氧化或羰基的还原，双键的引入或还原，氧原子的引入和芳香环的氧化裂解，这些反应是由脱氢酶或加氧酶催化的。 ②、生物甲基化是各种代谢物，特别是聚酮化物的生物合成中的重要反应。 ③、卤化作用对分子中含卤元素(大多数是氯)的次级代谢物是很重要的。 其特征如下： 许多次级代谢物是用不同的中间体作为建筑单位合成的。 例如： 、大环内酯类抗生素：其糖苷配基是由脂肪酸衍生的，其糖部分是由葡萄糖衍生的。 、真菌毒素和橘霉素：是由五个C2单位(Ac-CoA加上4个丙二酰CoA)，2个甲基和由C1库来的羧基合成的。 、新生霉素：具有更为复杂的来源，它是由葡萄糖、莽草酸、GLN、C1库、Tyr和乙酸或Leu合成的。 （2）诱导抗生素生物合成 前体具有调节抗生素生产的作用，尤其在细胞中的特殊合成酶的活性已被激活的情况下。 例1： 在带小棒链霉菌中头霉素C的一种前体，α-氨基己二酸是由赖氨酸合成途径来的。它与Pr合成竞争此前体的供应。加入过量的Lys， Lys途径中间体，二氨基庚二酸或α-氨基己二酸到发酵液中可增加头霉素的发酵单位。 例2： 产黄青霉的青霉素酰基转移酶可转化异青霉素N，除去青霉素N的侧链，换上天然青霉素的其他侧链。侧