《发酵工程》第4章培养基.ppt

3、 培养基设计在发酵过程优化控制中的作用和地位 分批发酵可分两个阶段: 生长阶段: 微生物快速生长，产物几乎不合成. 菌体酶系的变化主要发生该阶段。 产物形成阶段：时间相对较长，菌浓仅有少量变化，产物快速积累。菌体的酶系是相对稳定。 理论转化率与实际转化率： 理论转化率：理想状态下根据代谢途径进行物料衡算，所得出的转化率。 实际转化率：实际发酵过程中转化率。 由于副产物形成，原材料利用不完全等因素，实际转化率往往要小于理论转化率。 如何使实际转化率接近于理论转化是发酵控制的一个目标。 （一）理论转化率的计算 对于确定的化学反应，理论转化率可以通过反应方程式的物料衡算得出。 一些主要的代谢产物,因为它们的代谢途径比较清楚,所以可以给出它们的代谢总反应方程式。 有些生物反应的复杂性，给出定量代谢总反应方程式相当困难的，但这方面一直是研究重点。 葡萄糖转化为酒精的代谢总反应衡算式为： C6H12O6一一+2C2H5OH+2CO2 因此理论得率为： 例如：葡萄糖转化为酒精的理论转化率 对于某些次级代谢产物，通过代谢途径的解析也可给出代谢的总反应衡算式，Cooney根据化学反应的计量关系和经验数据得出下式： 在实际过程中确定碳源的数量时，还要考虑到用于菌体生长的维持消耗的量，表4-14列出了菌体在一些碳源中的细胞得率；对于前体还要考虑到实际利用率；其他营养物质也有相类似或另一些影响因素存在，因而实际的转化率要小于理论转化率。 理论与实际的差别： 理论得率为培养基成分在浓度确定时提供了重要的参考。 发酵过程中如何控制实际转化率尽可能地接近理论转化率一直是一个努力的方向。 理论得率具有指导意义： （二） 实验设计 首先，通过单因子实验确定培养基的成分； 然后，通过多因子实验确定各成分对培养基的大小及其适宜的浓度； 最后，为了精确确定主要影响因子的适宜浓度，可以进行进一步的单因子实验。 多因子实验，为减少实验次数，常采用实验设计方法，如正交实验设计、响应面分析等。 1、 正交实验设计 正交试验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少量的具有代表性的试验来代替全面试验，较快地取得实验结果。 正交实验的实质就是选择适当的正交表，合理安排实验的分析实验结果的一种实验方法。 具体分为四步: ①、根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表; ②、根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验; ③、根据正交表给出的实验方案，进行实验; ④、对实验结果进行分析，选出较优的实验条件以及对结果有显著影响因子。 举例: 确定赖氨酸产生菌FB31发酵培养基成分玉米浆、豆饼水解液、硫酸铵适宜浓度及其对发酵的影响。 解: 利用正交设计安排实验并分析结果。 (1)、确定因子和水平，列出因子水平表根据经验，豆饼水解液、玉米浆和硫酸铵的浓度变化见表4-15，共3个因子每个因子取三个水平。 (3) 实验结果及分析 正交实验结果的统计分析方法有极差分析法与方差分析法两种。 2、 响应面分析法 虽然正交实验设计是多因子实验安排中最常用的实验设计方法,其他实验设计方法还有很多,特别是一些实验方法结合计算机统计分析软件,使实验的安排和对结果的分析较正交设计更加完善和方便,这里我们仅仅举响应面分析法作一介绍。 响应面分析(response surface andysis)方法是数学与统计学相结合的产物，和其他统计方法一样，由于采用了合理的实验设计，能以最经济的方式，用很少的实验数量和时间对实验进行全面研究，科学地提供局部与整体的关系，从而取得明确的、有目的的结论。 它与“正交设计法”不同，响应面分析方法以回归方法作为函数估算的工具，将多因子实验中因子与实验结果的相互关系，用多项式近似，把因子与实验结果(响应值)的关系函数化，依此可对函数的面进行分析，研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系,并进行优化。 Box及其合作者于20世纪50年代完善了响应面方法学,后广泛应用于化学、化工、农业、机械工业等领域。 基本配制要求： 第一，营养不要太丰富(特别是有机氮源)，否则不易产孢子。 第二，所用无机盐的浓度要适量，不然也会影响孢子产