琼脂稀释法操操作步骤.pptVIP

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2020-09-09 发布于福建
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琼脂稀释法操操作步骤.ppt

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琼脂稀释法操作步骤原理 ●将抗菌药物配制到琼脂培养基中成:128u g/m1、64ug/m1、32ug/m1.0.06 g/m对倍稀释的浓度系列多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点种到琼脂表面,经35℃16-20小时培养 ●肉眼观察细菌生长,以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC) 抗菌药物保存液的准备1 估算抗菌药物最小称量 ●琼脂稀释法最高药物浓度为128ug/m1 ●药物和培养基的体积比1:14,即药物浓度将成 15倍稀释,因此保存液为 128ug/m1X15=1920ug/ml 如果1次用量为10m1,见抗菌药物最小称量=1920ug/m1*10m1 抗菌药物的效价抗菌药物保存液的准备2 抗菌药物稀释选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释, 稀释液需要量见下列公式抗菌药物实际称量*效价稀释液体积=保存液浓度(19209m 抗菌药物保存液的准备3 实际操作 ●先计算完成一批试验需几次完成,每次用量多少,然后可一起称量,一起稀释,然后按每次需要量分装在试管中,贴上标签,注明药物名称,浓度,体积数及配制日期,置与≤-20℃保存,备用。培养基需氧菌MH肉汤或琼脂苛氧菌嗜血杆菌属: Haemophilus test medium base+补充因子SR158 链球菌属:MHA琼脂+5%脱纤维羊血卡他莫拉菌属:MHA琼脂+5%脱纤维羊血淋球菌: CC Agar Base+L53 厌氧菌 Wilkins chalgren anaerobe琼脂菌液准备1 生长法: 无菌环取4-5个菌落大小形态一致的菌落顶部后接种于4-5m1MH肉汤内 ●35℃培养4-6小时到对数生长期,亦可过夜培养,但不允许超过18小时用肉汤/生理盐水校正至0.5麦氏管浓度1 2X108CFU/m1 菌液准备2 直接菌落悬浮法: ●从孵育了18-24h新鲜培养物的平板上,用无菌环取单个菌落 ●接种于无菌肉汤/生理盐水内 ●校正至0.5麦氏管浓度1-2X108CFU/m1 ●推荐用于苛氧菌和潜在的MRS 菌液准备3 对绝大多数细菌来说,上述用生长法或直接菌落悬浮法制备的0.5麦氏浊度的菌悬液,应该再用无菌肉汤或生理盐水行1:10 稀释,此时菌液浓度为1-2*107CFU/ml,调整好的菌液应该在制备后的15分钟内完成点种菌液准备4 ●如一次实验需完成50株或100株细菌,则细菌要编上工作序号1-50或1-100,并在结果记录纸上要一一对应写上工作序号和菌种编