荧光免疫层析技术原理与进展.pptVIP

荧光免疫层析技术的原理与进展 介绍人:罗敏  炎光免疫层析技术的基本原理 层析法( chroma tography)的原理是利用混 合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、 分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、 分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相( stationary phase) 和流动 Mobile phase)相组成。  固定相回物项以固定于固体物质上的 成分 流动相是可以流动的物质,如水或各种溶 剂 层析过程:当待分离混合物随流动相通过 固定相时,由于混合物各组分的理化性质 的差异,与固定相相互作用弱的组分随流 动相移动时受到的阻滞作用小,向前移的 速度快;与固定相相互作用强的组分向前 移动的速度慢。从而实现混合物中各组分 的分离  免疫层析法 免疫层析技术是建立在层析技术和抗 原一抗体特异性免疫反应基础上的 项新兴免疫检测技术  免疫层析技國定有检测线和控制线的条状纤 推层析啊为固定相,测试液为流动相,通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应 待测物 层析方向 免疫反应 免疫层析技术基本原理示意图  荧光( fluorescence 荧光物质吸收激发光的能量后,电子从基态跃 迁到激发态,当其回复至基态时,以发射光形式 释放出能量,称为荧光 发射光谱和激发光谱 发射光谱是指固定激发波长,在不同波长下 记录的样品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长,用不同波 长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射 强度。  荧光效率 定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式 发射荧光的光量子数(光强度) 荧光效率=吸收光的光量子数(激发光强度) 荧光寿命 定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程 度时所用的时间 各种荧光物质的荧光寿命不同  荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素作用下,发 射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭 引起荧光淬灭的因素:有如紫外线照射、 高温、某些硝基化合物、重氪化合物等  免疫层析技國定有检测线和控制线的条状纤 推层析啊为固定相,测试液为流动相,通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应 层析方向 免疫反应 免疫层析技术基本原理示意图  用荧光免疫层析法 夹心法 竞争法 双抗原夹 以抗体夹心法