动物生理学试验三鱼类血液涂片制作与血细胞计数.pptVIP

实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血液： 是一种由血浆和血细胞组成的流体组织，由心脏 搏动推动在心血管系统中不断循环流动，具有 运输、防御和 免疫 、 维持内环境的相对稳定 和 参与体液调节 等多种功能。 血液具有维持生物体内环境稳态的作用，正常情况下血 液中的的各项生理指标处于相对稳定的状态，同时各项指标 也能够反映一个生物个体的 健康程度 ，因而血液检测已成为 疾病检测最基本的技术。 多种多样的血液检测仪 血液检测能够辅助疾病诊断 血涂片 的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，也是 生物显微制片的基本方法之一，临床上应用极为广泛，特别 是对于各种血液病的诊断具有重要的价值。制备厚薄适宜， 分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术。 人体血液涂片 血液涂片技术在 水产动物疾病检测 过程中也有非常 重要的作用，比如细菌感染、病毒感染以及血液寄生虫疾 病的检测。目前该技术已成为水产技术从业人员的必备技 能，也是执业资格考试的重点内容。 涂片经瑞氏 - 吉姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈 现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。一般细 胞的细胞核嗜碱性，能被碱性燃料染成 蓝色 ，而细胞质基 质嗜酸性，能被酸性燃料染成 红色 。 血细胞计数法 是将小量待测样品血液的悬浮液置于一 种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称细胞计 数板），于显微镜下直接计数，根据血液稀释的倍数， 进一步推算出血液中血细胞数的一种方法。 鱼类麻醉前后对比示意图 2 、血液的采集 将准备好的 2mL 注射器，抽动活塞用肝 素钠溶液将注射器内湿润，为血液的采集做好准备工作。血 液的采集按实验 2 的采血方法进行，采好的血液保存于 1.5 mL 离心管中待用。 3 、推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端 刮取血滴，迅速使血液均匀分散在推片与载片的接触处 。然后使推片与载片呈 30 °～ 40 °，向另一端平稳地推 出，涂片推好后，放置于空气中使之自然干燥。 （ 1 ）将采出的血液滴在载片上 （ 2 ）另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘 ，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线 状。 （ 3 ）两玻片的角度以 30-45 °为宜，轻轻将双凹片 向前匀速推进，即涂成血液薄膜。 （ 4 ）血涂片 ? 不良血涂片 4 、血涂片染色 先将干燥血片用甲醇固定 3-5 分钟，将固定的血片置于 被 pH 6.4-6.8 磷酸盐缓冲液稀释 10-20 倍的吉姆萨染液中， 浸染 5 分钟（标本较少可用滴染法），取出用蒸馏水冲洗 ，再用伊红复染 1 分钟，用蒸馏水冲洗，待干后镜检。 冲洗后滴加少量伊红，染色 1 分钟 直接流水冲洗 1 分钟 （ 切勿先倒掉染液 ） 涂片经水洗干燥后镜检 涂片干燥后加吉姆萨染液染色 5 分钟 二、血细胞计数 ? 血细胞计数板的结构 ? XB-K-25 为计数板的型号和规格，表示此计数板分 25 个中格 。 0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高； 1/400mm 2 表示计数室 面积是 1mm 2 ，分为 400 个小格，每小格面积是 1/400mm 2 。 1 、血液稀释 用 10 微升移液枪取 10 微升血液于一新的 1.5mL 离心管中，再用 1000 微升移液枪吸 990 微升生理盐水 于离心管中（稀释 100 倍），轻轻颠倒混匀。 2 、计数板处理 用无水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭计数板 后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上 面。 3 、充液 取干净的计数板平放于实验桌上，将盖玻片置 入计数板正中央。用毛细血管吸取已稀释混匀后的血细胞悬 浮液，并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘，让血细胞悬液缓慢 流出，借毛细管现象而自动流入计数室内。