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- 2020-09-16 发布于广东
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专题 1
基因工程
③ 人工合成(反转录法 _和化学合成法。适合基因较小,序列已知)
5、 PCR技术:
基因工程概念:
基因工程又名 DNA重组技术或转基因技术原理:基因重组
水平: DNA分子水平操作对象:基因
特点:按照人们的意愿,定向改变生物性状
1、 1 基因工程的基本工具
1、基因工程:是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过 体外 DNA重组和转基因技术, 赋予生
物以 新的遗传特性 ,创造出 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在 DNA分子水
平上进行设计和施工的,又叫做 DNA重组技术 。原理是基因重组。
1) 概念: PCR全称为多聚酶链式反应,是一项生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术。
2) 原理: DNA复制
3) 条件:模板 DNA、DNA引物、热稳定 DNA聚合酶( Taq 酶)、四种脱氧核苷酸
4) 结果:以 2n 指数形式扩增
5) 过程:高温变性( 90~95℃)、低温退火( 55~60 ℃)、适温延伸( 70~75 ℃)循环重复
6、基因表达载体的构建的目的:使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ,可以 遗传至下一代 ,使目的
基因能够 表达和发挥作用 。
7、重组 DNA(重组质粒)的组成: 目的基因 +启动子 +终止子 +标记基因
( 1)启动子: 是一段有特殊结构的 DNA片段,位于基因的 首端,是 RNA聚合酶 识别和结合的部位,
能驱动基因 转录出 mRNA,最终获得所需的 蛋白质 。
( 2)终止子:也是一段有特殊结构的 DNA片段 ,位于基因的 尾端 。使转录停止
2、基因工程的基本工具:限制性核酸内切酶、
3、限制性核酸内切酶(限制酶)
DNA连接酶、载体
( 3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中
选出来。常用的标记基因是 抗生素抗性基因 。
是否含有目的基因 ,从而将 含有目的基因的细胞 筛
( 1)来源:主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。
( 2)功能特点:
① 能够识别双链 DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列;
② 使每一条链中 特定 部位(识别位点)的两个核苷酸之间的
③ 结果:形成 黏性末端 和平末端
( 3)例子: EcoRⅠ、 SmaⅠ
4、 DNA连接酶
(1) 两种 DNA连接酶: E.coli DNA 连接酶和 T4DNA连接酶
①相同点:都缝合 磷酸二酯 键。
磷酸二酯键 断开
8、转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
9、将目的基因导入 植物细胞( 1)农杆菌转化法 :
适用植物:双子叶植物、裸子植物
作用特点:农杆菌中的 Ti 质粒上的 T-DNA可整合到受体细胞的染色体 DNA上。将目的基因插入到
Ti 质粒上的 T-DNA上,即可在受体细胞内稳定遗传和表达
( 2)基因枪法 (微弹轰击法):单子叶植物常用的转化方法。成本较高
( 3)花粉管通道法 :我国独创。成功例子:抗虫棉
②区别: T4DNA连接酶来源于 T4 噬菌体,能够连接粘性末端和平末端
E.coli DNA 连接酶来源于大肠杆菌,只能连接粘性末端
5、载体
10、将目的基因导入 动物细胞 方法:显微注射法;此方法的受体细胞多是11、将目的基因导入 微生物细胞
( 1)原核生物作为受体细胞的特点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质较少
受精卵 。
( 1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源
DNA片段插入。
2+
( 2)转化的关键: Ca 处理,使细胞成为 感受态 细胞(容易吸收周围环境中的
DNA分子)
③具有标记基因,供重组 DNA的鉴定和选择。
( 2)载体种类: 质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒
( 3)最常用的载体是 质粒 , 它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有
自我复制能力的双链环状 DNA分子。
( 4)真正用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
( 5)改造后的质粒结构:一个或多个酶切位点;复制原点;标记基因
1、 2 基因工程的基本操作程序
1、基因工程的基本操作程序:
① 目的基因的获取
② 基因表达载体的构建(核心)
③ 将目的基因导入受体细胞
④ 目的基因的检测与鉴定
2、目的基因: 编码蛋白质的结构基因
3、目的基因的来源:①从自然界已有的物种中分离 ②人工方法合成
4、获取目的基因的常用方法:
① 从基因文库中获取(基因组文库, cDNA文库)
② 利用 PCR技术扩增
生物种类常用方法受体细胞
植物细胞
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