Coombs试验参考幻灯片.pptVIP

抗人球蛋白试验 （ Coombs 试验 ） 1 ? Coombs 试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗 体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体， 使红细胞凝集。 ? 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，其方 法有两类。 ? 直接 Coombs 试验：是检查被检红细胞上有无 不完全抗体。 ? 间接 Coombs 试验：是检查血清中游离的不完 全抗体 2 天然抗体与免疫血型抗体 比较 天然抗体 免疫血型抗体 性质 完全抗体 不完全抗体 Ig IgM IgG 抗原刺激 没有可察觉的抗原刺激 经抗原刺激后才产生 免疫发生的时间 早期 晚期 分子量 90 万 15 万 分子长度 950 250 沉淀系数 19S 7S 电泳分析 IgM 球蛋白 IgG 球蛋白 对 HDN 的意义＊ 小 大 通过胎盘能力＊ 不能 能 反应温度＊ 4℃比37℃强（冷抗体） 37℃（温抗体） 对血型物质＊ 能被血型物质中和 不被中和 3 IgM 抗体 ? 免疫球蛋白中 8%-10% 是由 IgM 组成 ? IgM 抗体分子量大，约为 90 万，有十个 抗原结合位点，可直接致敏和凝集红细胞， ? 它的平均寿命为 10 天， ? IgM 抗原抗体反应中常激活补体，从而引 起溶血反应。 4 IgM 抗体在盐水介质中凝集红细胞示意图 5 IgG 抗体 ? IgG 是体液免疫应答产生的主要抗体，在血 清中含量最高。约占免疫球蛋白的 75% 。 ? IgG 是唯一的能通过胎盘进入胎儿体内的免 疫球蛋白，同种 IgG 血型抗体通过胎盘，可 引起新生儿溶血病。 ? 最常见的是 ABO 与 Rh 血型系统。 6 IgG 凝集红细胞示意图 IgG 在盐水介质中一般不产生凝集 7 抗球蛋白试验 抗球蛋白 8 试剂及器材 1 、多特异性抗球蛋白试剂（ lgG 、 C3d ）； 2 、柱凝集抗人球卡； 3 、阳性对照细胞（取 3 份正常人 O 型 Rh （ D ）阳性红细胞等 量混匀，经生理盐水洗涤后取少量压积红细胞，加抗 D 血 清，置 37 ℃ 水浴致敏 1 小时，取出后用生理盐水洗涤 3 次， 配成 5% 红细胞悬液）； 4 、阴性对照细胞（取 3 份正常人 O 型红细胞等量混匀，经生 理盐水洗涤后，配成 5% 红细胞悬液；或直接取 Rh （ D ）阴 性红细胞）； 5 、受检者 5% （ 1% ）红细胞悬液； 6 、 0.9% 生理盐水； 7 、柱凝集卡式配血系统 8 、滴管（加样枪）、蜡笔或记号笔、试管、显微镜、 37 ℃ 水浴箱、细胞洗涤离心机等。 9 直接抗球蛋白试验 （ DAT ） 10 原理 ? 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体 存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。 ? 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗原 抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 ? 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全抗 体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见 的凝集。 ? 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红细 胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。 11 直接 Coombs 试验 抗人球蛋白 自身抗体 致敏 RBC 可见凝集 12 手工法操作 1 、 取患者抗凝全血适量于试管中，加生理盐水洗涤 3 次，最后一次洗涤离心后，弃上清液，用生理盐水配 成 5% 红细胞悬液； 2 、 取 3 支试管，作好标记（患者、阳性、阴性）； 3 、 取患者 5% 红悬液 1 滴于试管中，加生理盐水洗涤一 次；尽可能弃净上清液； 4 、 在阳、阴性试管中分别加入阳性和阴性对照红悬液 1 滴； 5 、 在各管中滴加多特异性抗球蛋白试剂 1 滴，混匀； 6 、 同时以 1000r/min 离心 1 分钟，轻轻摇动，先用肉 眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察 13 柱凝集卡式法操作 1 、取出柱凝集 Coombs 卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。 2 、分别加入 1% 被检红悬、阳性红悬、阴性 红悬各 50 ul 。 3 、不孵育，将卡放入专用离心机离心。 4 、取出凝集 Coombs 卡，观察试验结果。 14 DAT 操作表 反应物 检测管 阳性对照 阴性对照 被检红细胞悬液 1 滴 阳性红细胞悬液 1 滴 阴性红细胞悬液 1 滴 抗人球蛋白试剂 1 滴 1 滴 1 滴 15 微柱卡 Coombs 试验 RBC 可免洗涤 ? 因为 RBC 的密度远大于血清中的球蛋白，当 离心时， RBC 的沉降速率远大于球蛋白，故 RBC 首先和凝胶中的抗人球蛋白反应，而不 受 血清中的球蛋白干扰，从而可免除洗涤这一 步骤。 16 结果判断 ? 先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无 凝集，阳性对照管出现 +++ — ++++ 凝集， 说明检测管结果可信。 ? 被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性，