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第 43 讲 微生物的培养与应用
[ 考纲要求 ] 1. 微生物的分离和培养。 2. 某种微生物数量的测定。 3. 培养基对微生物的选择
作用。
考点一 微生物的实验室培养
1. 培养基的分析
(1)
据物理状态的不同,培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型
(
×
)
(2)
培养 基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分
(
√
)
(3)
在配制培养基时,除满足营养需求外,还应考虑
pH、 O2 及特殊营养物质的需求
(
√
)
2. 无菌技术 ( 连一连 )
3. 纯化大肠杆菌
制备固体培养基的流程
计算 → 称量 → 溶化 → 灭菌 → 倒平板
纯化大肠杆菌的方法
常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
①平板划线法: 是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,
将聚集的菌种逐
步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法: 是将菌液进行一系列的梯度稀释,
然后将不同稀释度的菌液分别涂
布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。
易错警示
(1) 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同:①自养微生物所需的碳
源、氮源来自含碳、含氮的无机物,而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的
有机物, 因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。
②含氮无机物不但能给
自养微生物提供氮源,也能作为能源物质,提供能量,如
NH3 既作为硝化细菌的氮源也
作为能源。 (2) 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项:
①倒平板的适宜温度是 50 ℃
左右, 温度过高会烫手, 过低培养基又会凝固。②平板需倒置,这样既可使培养基表面
的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
(3) 平板划线操作
1
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的注意事项: ①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。 ②灼烧接种环, 待其冷
却后才能伸入菌液, 以免温度太高杀死菌种。 ③划线时最后一区不要与第一区相连。 ④ 划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。
1. 下列无菌操作中,错误的是 ( )
A.无菌操作的目的是防止杂菌污染
B.用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒
C.实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行
D.玻璃器皿 ( 吸管、培养皿 ) 可用酒精擦拭
答案 D
解析 对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行,
防止瓶口的微生物污染培养基。 对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消
灭其中的微生物,用酒精擦拭不能达到目的。
2. 下列是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答:
试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
用量 5 g 10 g 5 g 20 g 1 000 mL
(1) 培养基的类型有很多,但培养基中一般都含有水、碳源、 ____________和无机盐。
上述培养基配方中能充当碳源的成分是 __________________________ 。培养基配制完成
以后,一般还要调节 pH,并对培养基进行 __________ 处理。该培养基从物理性质上分
类属于 ____________ 。
分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________ 和 ____________________。
假设培养结束后,发现培养基上菌落连成一片,可能的原因是什么?( 列举两项 )
________________________________________________________________________
__________ ______________________________________________________________ 。
答案
(1)
氮源 牛肉膏和蛋白胨
灭菌
固体培养基
(2) 平板划线法
稀释涂布平
板法
(3)
稀释倍数不够,菌液的浓度太高;划线时,划完第一次没有灭菌即接着划第
二次;培养过程中灭菌不严格,受到了其他微生物的污染
( 任选两个 )
解析
培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源。
配制培养基时加入了琼脂,因此该
培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调
pH 和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元
素,可作为有机碳源。 分离纯化微生物一般用平板划线法和稀释涂布平板法。
平板划线
法中每次划线前都要将接种环灼烧灭菌,
以杀死上次划线时接种环上残留的菌种;
采用
稀释涂布平板法时稀释度要足够高,否则会使微生物不能分散成单个细胞。
1. 微生物和动植物营养要素的比较
项目 碳源 氮源 能源
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