氨基酸工艺学第十三章..pptVIP

十三章 异亮氨酸、亮氨酸与缬氨酸发酵 罗娜 第一节 分支链氨基酸的生物合成途径和代 谢调节机制 支链氨基酸包括L-缬氨酸(L-valine)、L-亮氨酸(L-leuine)和L-异亮氨酸(L-isoleuine),因其疏水脂质链都具有分支的甲基基团,又称之为分支链氨基酸。支链氨基酸作为人体必需氨基酸,不仅是蛋白质的合成原料,而且还具有特殊的生理和生物学功能,亦可作为生物体能源，也作为生物体成分的前体。 PC：磷酸烯醇式丙酮酸酶羧化酶 AK：天冬氨酸激酶 HD：高丝氨酸脱氢酶 TD：苏氨酸脱氢酶 AS：乙酰羟基酸合成酶 HT：高丝氨酸激酶 支链氨基酸的合成途径和调节机制 第二节 异亮氨酸发酵 什么是异亮氨酸？ 异亮氨酸 （Isoleucine,Ile ），又称“异白氨酸”，系统命名为“α -氨基-β-甲基戊酸”。是人体必需氨基酸之一，属脂肪族中性氨基酸的一种。化学式：CH3CH2CH(CH3)CH(NH2)COOH。分子量：131.17 。菱形叶片状或片状晶体，味苦。熔点：284摄氏度。溶于水，微溶于乙醇。 L-异亮氨酸的用途 是合成人体激素、酶类的原料，具有促进蛋白质合成和抑制其分解的效果，在人体生命活动中起着重要的作用，因此，在食品和医药行业具有广泛的应用及商业价值。 食品方面：主要用于食品强化，使各种氨基酸平衡，提高食品的营养价值。 医药方面：3种支链氨基酸组成的复合氨基酸输液以及大量用于配置治疗型特种氨基酸的药物，如肝安、肝灵口服液，对治疗脑昏迷、肝昏迷、肾病等具有显著疗效，并可取代糖代谢而提供能量，是比较昂贵的氨基酸原料药之一。 一、L-异亮氨酸的合成途径及调节机制 L-异亮氨酸的生产方法 添加前体物发酵法： 1 这种是利用葡萄糖作为碳源和能源，再添加特殊前体物质，经过微生物作用将其转化为目标氨基酸的方法。 这种方法可以避免生物合成途径中的反馈调节，但是其前体物质成本太高。 很少用 L-异亮氨酸的生产方法有提取法、化学合成法和发酵法三种，由于化学合成法产生的异构体难分离，所以目前工厂生产上实施的主要是发酵法，也就是利用微生物的代谢作用，其又包括以下两种： 直接发酵法： 2 借助微生物具有合成自身所需的氨基酸的能力，对其进行诱变处理，选育出营养缺陷型或氨基酸类似物抗性突变株，以解除代谢调节中的反馈阻遏和反馈抑制，从而达到过量积累目的氨基酸的目的。 添加前体物发酵法： 1 这种是利用葡萄糖作为碳源和能源，再添加特殊前体物质，经过微生物作用将其转化为目标氨基酸的方法。 这种方法可以避免生物合成途径中的反馈调节，但是其前体物质成本太高。 很少用 L-异亮氨酸高产菌应具备的生化特征： 二氧化碳固定反应能力强 天冬氨酸合成酶能力强 天冬氨酸激酶活力强 高丝氨酸脱氢酶活力强 苏氨酸脱氢酶活力强 乙酰羟基酸合成酶活力强 二氢吡啶-2,6-二羧酸合成酶活力微弱或丧失 琥珀酰高丝氨酸转琥珀酰酶活力微弱或丧失 谷氨酸脱氢酶活力弱 L-异亮氨酸产生菌的选育方法 1、切断或减弱支路代谢 2、解除菌体自身反馈调节 3、增加前体物的合成 4、切断进一步代谢途径 一、基于代谢过程的氨基酸工程菌构建的具体思路 代谢过程的具体思路和常规诱变育种技术有所不同 （1）改变代谢流 ①加速限速反应 ②构建代谢旁路 ③改变能量代谢途径 ④改变分支代谢途径的流量 （2）扩展代谢途径和构建新的代谢途径 ①延伸代谢途径 ②构建新的生物合成途径 二、基于代谢工程策略构建L-异亮氨酸高产菌 氨基酸工程菌的构建策略 1、借助于基因克隆与表达技术，将氨基酸生物合成途径中的限速酶编码基因导入生产菌中，通过增加基因剂量和（或）更换表达调控条件，扩增其表达。导入的限速酶基因既可以是生产菌自身的内源基因，也可以是来自非生产菌的外源基因。 2、采取类似的方法，扩增表达氨基酸输出系统的关键基因，或降低某些基因产物的表达效率，最大限度地解除氨基酸及其生物会合成中间产物对某些生物合成途径可能造成的反馈抑制。 3、将多种完整的氨基酸生物合成操纵子导入另一种氨基酸的生产菌中，构建能同时生成两种甚至多种氨基酸的工程菌。 第三节 亮氨酸发酵 什么是亮氨酸？ L-亮氨酸，又称白氨酸，化学名为α一氨基异己酸，1819年Proust首先从奶酪中分离得到。后来，Braconnot从肌肉与羊毛的酸水解物中得到其结晶，并定名为亮氨酸。L一亮氨酸是常见十八种氨基酸中的一种，也是人体八种必需氨基酸之一。L一亮氨酸为白色结晶或结晶粉末，是一种非极性氨基酸，味微苦，溶于