临床微生物检验_实验七.pptVIP

* 临床微生物学检验第七个实验周2013检本 实验考试 考试日期：2016.05.25 考试安排： 第一批—14:00－ 15:00（学号前22人） 第二批—15:10－16:10（学号22以后所有人） 考试形式：基础操作+涉及实验的简单问答 微生物检验实验考试评分标准表  评分项目 分值 无菌概念 10 课堂纪律 5 规范性 5 熟练程度 10 操作过程 70 操作步骤 35 实验结果 35 合计 100 实验要求 掌握溶脲脲原体、人型支原体的培养检测方法 掌握外斐反应的原理操作和结果判定 掌握常见白假丝酵母菌的培养特点和鉴定方法 熟悉冷凝集试验的原理、操作和结果判定 第一天实验内容 1.真菌接种（1个沙氏平板/人） 2.支原体检测：接种支原体液体培养基（UU、MH) （各1瓶/人） 3.冷凝集试验（每组做） 4.外斐试验（每组做） 1.MH、UU培养基 2.试管 3.外斐试剂 4.加样枪和枪嘴 5.待检血清 6.人血清+人红细胞 试 剂 常用培养基：沙氏培养基(sabouraud) 培养基成分： 酵母浸膏、1%蛋白胨、4%葡萄糖、2%琼脂、维生素B等、可加入抑制剂(氯霉素、庆大或放线菌酮) 假丝酵母菌的检测 假丝酵母菌特点：菌体圆或卵圆形，革兰阳性、着色不均匀，出芽方式繁殖，形成假菌丝；类酵母型菌落，菌落外观类似细菌菌落，假菌丝由菌落向培养基深部生长，伸入培养基中。 白色念珠菌 白色念珠菌－假菌丝深入培养基中 操作：1个沙氏平板/每人，分区划线接种 支原体的检测方法 标本采集： 分离培养： 溶脲脲原体培养基 基本成分：牛心消化液，20%小牛血清、酵母浸液 指 示 剂：酚红 底 物：尿素 人型支原体培养基： 基本成分：同上 指 示 剂：同上 底 物：精氨酸 标本的采集 （1）非淋菌性尿道炎患者——尿道分泌物、中段尿。 （2）慢性前列腺炎患者——前列腺液。 （3）原因不明的不育症患者——精液。 （4）阴道炎、宫颈炎患者——炎性分泌物 尿液标本→离心→取沉淀物→接种。 支原体的分离培养：液体培养基接种（每人做） 模拟拭子—洗脱--挤干--弃去棉支—吸取100ul液体标本接种于各种支原体液体培养基中（UU、MH） 冷凝集试验的原理 原理：肺炎支原体感染患者的血清中常产生非特异性冷凝集素（其本质是IgM），在4 ℃下，可与“O”型人红细胞或自身红细胞发生凝集，已凝集的红细胞在37℃下，凝集现象消失。用于肺支感染的辅助诊断。 冷凝集试验原理 抗原决定簇不能暴露，不能与抗体结合 混 合 暴露的抗原决定簇与抗体结合 混 合 37℃ 4℃ 37℃ 冷凝集试验原理 （1） 离心，分离血清。 （2）稀释血清：取试管8支，每管加NS 0.5ml,并于第1管中加入待检血清0.5ml，混匀后吸出0.5ml，加入第2管中混匀，如此倍比稀释至第7管，弃去0.5ml，最后1管不加血清作为阴性对照。 （3）每管加2%红细胞悬液0.5ml，混匀，最终稀释度为1:4、1:8…1:128。 （4）置4℃冰箱24h，观察结果。 冷凝集试验操作步骤 2%自身红细胞制备： 1.洗涤红细胞：弃去血清，用玻璃棒搅拌血细胞，加入约1mlNS于试管中，混匀后，再用滴管吸取红细胞悬液置于另一试管中 2. 加入NS到红细胞悬液中，NS量约2/3管高度，用滴管吹吸3-4次后，离心3000r/min 15分钟。 3.弃去上清，重复步骤2两次。 4.取100ul已洗涤红细胞+4.9ml生理盐水，混匀。 外斐试验 原理： 用已知的变形杆菌OX19 OX2 Oxk 三种抗原与患者血清进行凝集实验，检测病人血清中有无相应的抗体。 1.准备3排试管，每排8支 2.另取一支粗试管（或小三角烧瓶、烧杯），加NS 2.7ml及血清0.3ml，混匀，即为1：10稀释 3.取1：10稀释血清，每管0.5ml分别放入各排第1支试管中 4.