肝受体同系物-1（LRH-1）在产蛋与就巢鸡卵泡中的表达差异及其对颗粒细胞增殖与凋亡的影响.pdfVIP

摘 要 卵巢是动物生命周期的初始环境，其中发生着持续的自动修复，而这个动态反馈体 系的稳定源于卵泡内细胞增殖与凋亡的循环，其中涉及的内分泌信号通路包含多种激素、 激素受体和细胞因子。在哺乳动物卵巢组织中，肝受体同系物-1 （LRH-1）在颗粒细胞 和黄体细胞中通过调控细胞色素P450 家族表达，影响雌激素与孕酮的分泌，同时促进 卵泡发育和维持排卵过程。然而，LRH-1对家禽繁殖功能的影响，尤其是对就巢个体的 影响尚未报道。因此，研究LRH-1对家禽繁殖性能的调控作用具有重要的意义。四川山 地乌骨鸡黄羽系就巢性强，产蛋量少，产蛋率低，其总体繁殖力不高，因而影响了种禽 的经济效益和产业发展。本试验从30 周龄四川山地乌骨鸡黄羽系中选取有就巢行为的 母鸡80 只，并以40 只正常产蛋母鸡作为对照，研究群体就巢期的生理特征；分析LRH-1 在就巢和非就巢个体卵泡颗粒层中的表达差异。随后选取10 只30 周龄罗曼蛋鸡，通过 分离培养卵泡颗粒细胞研究LRH-1对颗粒细胞发育的影响；探索LRH-1 对卵泡选择与 卵泡成熟过程所起的关键性的作用，以期阐明LRH-1对颗粒细胞增殖、凋亡的调控机制。 本研究主要结果如下： （1）就巢期表型数据测定结果显示，与产蛋鸡体重与采食量 （分别为2.4 k 与113 g/d ）相比，鸡就巢期体重、采食量随就巢时间的增加持续下降 （就巢14 d 分别为2.0 k 与67 g/d ），而就巢第7 d 体温明显下降（由42 ℃降至41.7 ℃），但随后恢复至正常 水平。 （2 ）利用荧光定量PCR 分析LRH-1 基因在黄羽山地乌骨鸡不同阶段卵泡颗粒层 中的表达水平，发现LRH-1在产蛋鸡各等级卵泡与小黄卵泡颗粒层中均有表达，在就巢 期小黄卵泡中没有表达，并且在F1 与F6 卵泡中的表达量显著高于其他卵泡（P 0.05 ）。 调控孕酮合成的细胞色素P450 家族11 亚家族A 多肽1 （CYP11A1）的表达模式与调控 雌激素合成的细胞色素P450 家族 19 亚家族A 多肽1 （CYP19A1）相反，CYP11A1在 F1 卵泡的表达水平最高，在产蛋与就巢期小黄卵泡中均没有表达；而CYP19A1在F 1 检测不到表达，但在产蛋期小黄卵泡有表达，同时在F6 卵泡高表达。 （3 ）在体外培养罗曼蛋鸡卵泡颗粒细胞过程中，通过流式细胞仪检测颗粒细胞凋 亡率发现，干扰LRH-1 后36 h ，与阴性对照组相比，抑制LRH-1 可显著增加颗粒细胞 的早期以及晚期凋亡率 （对照组：5.2 %与5.0 % ；转染组：14.1 %与13.5 %，P 0.05 ）， 荧光定量PCR 检测到凋亡相关基因Bcl-2和p53 基因mRNA 的相对表达量显著减少（P II 0.05 ）。干扰24 h 后，通过酶联免疫分析法检测细胞培养基中的生殖激素浓度，结果 显示雌激素与孕酮浓度显著减少（P0.05 ）。 （4 ）随后利用LRH-1 过表达载体转染颗粒细胞，通过CCK-8 法检测颗粒细胞增殖 情况。结果发现，过表达LRH-1 能够极显著促进转染24h 时的颗粒细胞增殖 （阴性对照 组OD = 1.8；转染组OD = 1.2，P0.01 ），并且作用效果随持续时间逐渐增强。本试验 中，转染处理24 h 时，相比对照组，颗粒细胞增殖细胞核抗原 （PCNA）与B 淋巴细胞 瘤-2 （Bcl-2）基因显著增加 （P0.05 ）。 综上所述，LRH-1主要在产蛋鸡F1 与F6 卵泡颗粒层中表达，在就巢期卵泡没有表 达，该基因在鸡卵泡发育过程中发挥促进细胞增殖的作用。此外，LRH-1 能够通过促进 雌二醇、孕酮的合成抑制鸡卵泡颗粒细胞凋亡。 关键词：鸡；肝受体同系物-1 基因；就巢；颗粒细胞；细胞增殖与凋亡；生殖激素 III Abstract Ovary is the initial environment of animal life cycle, in which continuous automatic