枯草芽孢杆菌HH2对大熊猫离体粪便菌群及犬肠道菌群多样性的研究.pdfVIP

摘 要 HH2 B.subtilis HH2 大熊猫源枯草芽孢杆菌 （ ）是本实验室从大熊猫粪便中分离 并鉴定的一株能够分泌多种抗菌物质的细菌。它在不同碳源下能调控自身的分解能 力、减少非必须能量的消耗；在恶劣环境中能形成芽孢，对温度和酸度有极强的耐受 力并表现出良好抗逆性等。为了研究大熊猫源B.subtilis HH2 未来能否作为大熊猫的 益生菌进行人工饲喂和添加，本论文进行了以下两个试验： 1.观察枯草芽孢杆菌B.subtilis HH2 对亚成体大熊猫离体粪便菌群的影响：本试 8 验选取 只亚成体大熊猫新鲜粪便，均等混合制备为大熊猫粪便培养基，分为两组， 8 −1 实验组加入5.0 × 10 cfu mL B.subtilis HH2 菌液1mL，对照组加入等体积PBS液， 37℃ 0h 24h 48h 72h DNA 恒温摇床于 、 、 、 培养后分别取培养基悬液作为样本，进行 提取、PCR扩增，使用16SrRNA 进行高通量测序分析。 24h 结果显示大熊猫粪便培养至 ，实验组粪便微生态群落多样性升高，其余时段 无明显变化；物种丰度分析表明：实验组在24h 时，门分类水平，厚壁菌门、变形菌 γ- 门呈增加趋势；纲分类水平中， 变形菌、梭菌纲呈增加趋势；目分类水平中肠杆菌 目、假单胞菌目、气单胞菌目呈增加趋势；科分类水平中，肠杆菌、气单胞菌呈增加 趋势；属分类水平中，实验组气单胞菌属、假单胞菌属和鞘氨醇杆菌属呈增加， B.subtilis HH2 具有丰富优势菌群一过性作用。 2.为探究大熊猫源B.subtilis HH2 分离株对亲缘动物犬肠道菌群的影响，选择3-4 11 6 5 月龄比格犬 只，随机分为两组 （实验组： 只，对照组： 只），在饲喂基础日粮 8 −1 后，每天对实验组犬灌服5.0 × 10 cfumL B.subtilis HH2 菌液10mL、对照组灌服等 9 −1 14d 15d 2.0 10 cfumL 体积生理盐水至 后，在 时对所有犬只灌服等体积 × 大肠杆菌 0h 24h 48h 72h DNA 菌液进行攻毒，于攻毒后 、 、 、 采集肛门拭子，肛门拭子进行 提 取、PCR扩增，使用16SrRNA 进行高通量测序分析。 24h 高通量分析表明攻毒后 ，实验组中肠道群落多样性增加，其他时段变化趋于 24h 平缓。实验组 物种丰度分析中发现，门水平，厚壁菌门，变形菌门和拟杆菌门为 优势物种；纲水平，变形菌和拟杆菌相对丰度占主导，优势菌群趋于丰富；目水平， 48h 对照组中气单胞菌，肠杆菌的相对丰度更高。 时段，实验组拟杆菌纲、梭菌纲丰 度高于对照组，而弯曲菌目、气单胞菌目丰度低于对照组。基于科水平，攻毒后，螺 杆菌科实验组高于对照组，消化链球菌科实验组低于对照组；基于属水平，螺杆菌属、 I 乳杆菌高于对照组，消化链球菌属实