生物化学:血清TC测定(酶法).pptVIP

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* 实验 血清胆固醇测定 * 【实验要求】 1.掌握掌握血清胆固醇的原理,操作方法 2.熟悉胆固醇测定的临床意义; 3.巩固分光光度计的使用。 * 【实验原理】 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯酶(CHE)水解成游离胆固醇(Chol),后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林(4-AAP)与酚(三者合称PAP),生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在520nm左右,吸光度与标本中TC含量成正比, * 【操作步骤】 加入物 / ml 测定管(U) 标准管 (S) 空白管 (B) 待测血清 0.02 - - 胆固醇标准液 - 0.02 - 蒸馏水 - - 0.02 试剂 2.0 2.0 2.0 立即充分混匀,37C°水浴5分钟,用520nm波长比色,0.5CM 比色杯,以空白管调零,读取各管吸光度。 * 【计算】 血清胆固醇(mmol/L)= Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度 * 【参考范围】 血清胆固醇:<5.17 mmol/L * 【临床意义】 1.增高 见于脂肪肝、肝脏肿瘤、甲低、严重糖尿病、粘液性水肿、动脉粥样硬化、妊娠、肾病综合征等;家族性高胆固醇血症时显著增高。 2.降低 常见于急性肝坏死、肝硬化;甲亢、恶性贫血、溶血性贫血、营养不良等也可见降低。 * 【注意事项】 1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还原性物质将使结果受到干扰。 3、该方法灵敏度高、准确度和精密度好,线性范围宽,可达15.51mmol/L * 【打扫卫生】 1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品,离开实验室。 * 谢 谢!

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