甲胎蛋白(AFP)测定.docVIP

授课对象： 06级检验1-5班 课 时： 2学时 甲胎蛋白（AFP）测定 目 标：1.掌握ELISA法测定AFP的原理及注意事项 2.熟练地进行AFP测定 3.了解AFP测定的主要临床意义 实验用品： AFP测定试剂盒、酶标仪 内 容： 原理： 本试剂盒采用针对抗原不同，决定簇的双单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA双抗夹心法原理检测人血清中AFP含量。 操作步骤： 1. 加样：将包被孔编号，留1孔作空白对照，其余孔用微量加样器依次加入标准及待测样品各100ml。 2．孵育：置37℃温育30min 3．洗涤：甩去孔内液体，在各孔内加入洗涤液2滴，轻轻震荡3~5次， 弃之，然后用蒸馏水加满各孔，甩掉；反复5次最后在吸干纸上拍干。 4．加酶结合物：每孔加入酶结合物100ml，空白孔不加。 5．置37℃温育15min 6．重复步骤“3” 7．显色：每孔加入底物50μl，再加显色剂50μl，充分混匀，室温避光反应2~5min。 8．终止：每孔加终止液50μl，终止反应。 参考范围： 0~20 μg/L 注意事项： 1．操作前请仔细阅读说明书，应严格控制反应温度和时间。 2．试剂盒使用前要充分恢复到室温。 3．洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急，而致假阴性。 课后小结：