保健食品中洛伐他汀的测定.pdfVIP

九、保健食品中洛伐他汀的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中洛伐他汀的液相色谱测定方法。 本方法适用于以红曲及其加工品为原料的保健食品中内酯（闭环）洛伐他汀及酸式（开 环）洛伐他汀的测定。 2 原理 试样经 75% 乙醇溶液超声提取，采用液相色谱分离内酯（闭环）及酸式（开环）洛伐 他汀，紫外检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇（CH OH ）：色谱纯。 3 3.1.2 无水乙醇（CH CH OH ）。 3 2 3.1.3 磷酸（H PO ) 。 3 4 3.1.4 氢氧化钠（NaOH ）。 3.1.5 盐酸（HCl ）：含量：36%~38% 。 3.2 试剂配制 3.2.1 75% 乙醇（v/v ）：将无水乙醇和水按75+25 的体积比混合均匀。 3.2.2 0.2mol/L 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠1.6g，加水使溶解成200mL ，即得。 3.2.3 0.2mol/L 盐酸溶液：吸取盐酸1.8mL，加水适量使成100mL ，即得。 3.3 标准品 洛伐他汀标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表 1，纯度≥98% ，或经国家 认证并授予标准物质证书的标准物质。 表1 洛伐他汀标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 洛伐他汀 Lovastatin 75330-75-5 C24H36O5 404.54 3.4 标准溶液配制 3.4.1 洛伐他汀标准储备液（400μg/mL ）：准确称取洛伐他汀标准品40mg （精确至0.01 mg ）， 用75% 乙醇溶解并定容至100mL。 3.4.2 洛伐他汀标准系列工作液：用流动相稀释，配制浓度为 8.00μg/mL 、20.0μg/mL 、 40.0μg/mL 、80.0μg/mL、160μg/mL、320μg/mL 的系列标准工作液。 3.4.3 定性用酸式（开环）洛伐他汀溶液：称取洛伐他汀（内酯）标准品4mg ，用0.2mol/L 氢氧化钠溶液定容至 100mL，在 50℃条件下超声转化 1h，冷却至室温后再放置 1h，用 0.2mol/L 盐酸溶液调节pH 至中性。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器（UV ）。 4.2 分析天平：感量为0.01mg 和0.0001g 。 4.3 超声波清洗器，功率≥250W 。 39 4.4 涡旋混合器。 4.5 离心机：转速≥3500 r/min 。 5 分析步骤 5.1 试样制备 取片剂、颗粒剂等固体样品适量，研磨均匀；胶囊剂、软胶囊剂取内容物，研磨或混匀。 称取上述混匀的试样适量（相当于含洛伐他汀约5mg ），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入50mL 75% 乙醇，密塞，称定重量，超声提取（功率250W ，频率33kHz ）60min ，放冷， 再称定重量，用75% 乙醇补足减失的重量，摇匀，以3500r/min 的转速离心10min，取上清 液，经0.45μm 微孔滤膜过滤，滤液作为试样待测液。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱柱：C18 柱，250mm×4.6mm ，5μm 或同等性能色谱柱。 5.2.2 柱温：25℃。 5.2.3 检测波长：238nm 。 5.2.4 流动相：甲醇+水+磷酸=385+115+0.14 。 5.2.5 流速：1.0mL/min。 5.2.6 进样量：10μL。 5.3 标准曲线的制作 将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测得相应的峰面积，以标准系列工作液的浓 度（μg/mL ）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 5.4 试样溶液的测定 将试样待测液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，测定内酯型（闭环）洛伐他汀或酸 式（开环）洛伐他汀峰面积，分别代入内酯型（闭环）洛伐他汀标准曲线计算，得到待测液 中内酯型（闭环）洛伐他汀或酸式（开环）洛伐他汀的浓度（