固氮施氏假单胞菌的根表定殖特性和促进生长能力研究.pdfVIP

摘 要 固氮微生物在宿主植物根分泌物诱导下，趋化运动到根表定殖生长，形成固氮生物膜，从而 获得根际竞争优势地位，但相关分子机制研究知之甚少。固氮施氏假单胞菌A1501分离自水稻根 际，具有趋化、生物膜形成、促生等能力，是系统研究微生物根表定殖的模式菌株。本实验室在 基因组水平上鉴定了与生物膜形成相关基因，包括Gac/Rsm 基因 （如RNA 结合蛋白基因rsmA、 54 70 非编码RNArsmYZ 和双组分调节蛋白基因gacA）、sigma 因子基因 （如σ 因子rpoN、σ ECF 亚 家族algU）、环二鸟苷酸降解酶基因bifA、环二鸟苷酸合成酶基因sadC、细菌纤维素合成酶基因 bcsA 以及胞外多糖合成酶基因pslA 等，进行了纯培养条件下生物膜形成的调控机制研究，为进 一步开展根表定殖过程中生物膜形成相关基因的作用机制研究奠定重要工作基础。本论文采用竞 争性接种、抗性板筛选计数方法，系统研究了生物膜相关基因在水稻根表竞争性定殖及促进玉米 生长中的功能与作用，主要研究结果如下： 1. 在模拟根际缺氮寡营养条件下，rsmA 基因突变导致生物膜形成能力增强，相比野生型上 调17%，表明该基因对生物膜的形成可能起一定的抑制作用；而pslA、gacA、rpoN、sadC、algU、 rsmY 以及rsmZ 基因的突变导致生物膜形成能力显著下降35-70%，表明其对生物膜形成可能起重 要的作用；而bifA 基因突变对生物膜的形成影响不大。 2. 在可控温度和光照的水培条件下，将野生型与生物膜相关基因突变株等比例接种水稻幼苗 根际，竞争性定殖结果表明：负调控生物膜形成基因rsmA 和rsmZ 突变导致定殖能力显著增强 55%和65%。而algU、pslA、sadC 以及bcsA 基因的突变，导致定殖能力显著降低30-73%；gacA 及rsmY基因突变对定殖能力影响不大。以上突变株的定殖能力结果与模拟根际条件下生物膜形 成能力总体一致，表明固氮菌可能通过调控生物膜的形成实现根表有效定殖。 3. 在温室土培条件下，将rsmA、algU、sadC、pslA 基因突变株与野生型分别以单一菌株或 等比例混合接种玉米，促生实验结果表明：无论单一菌株或混合菌株接种，rsmA 基因突变后促 使玉米生物量增加，株高和根重增加4.4%和 12.8%；而pslA 或algU基因突变株接种后的玉米生 物量下降26.1%，根重下降6.4-21.8%。此外，相比algU和pslA 基因突变株混合接种，rsmA 和 sadC基因突变株混合接种后玉米植株重量增加5.8%，根重增加4.9%。以上结果表明固氮菌生物 膜形成相关基因的突变对植物宿主的生长量产生重要影响。 综上所述，本研究证明固氮施氏假单胞菌生物膜形成相关基因参与根表定殖，并在促进宿主 作物生长中发挥重要作用，相关进展将为揭示根表定殖和生物膜形成的调控机制，探索作物与固 氮微生物互作的分子机制提供了重要理论基础。 关键词：固氮施氏假单胞菌A1501，基因突变，生物膜，根表定殖，促进生长 I Abstract Root exduatesplays an important role in the interaction between plant host and the nitrogen-fixing microorganisms. As induced by root exduates, the nitrogen-fixing microorganisms can be chemotactic, swimmingtowardto colonize and achieve aggregatesby formingbiofilm,thereby gaining a competitive advantage in the rhizosphere. However, the molecular mechanisms involved in these processes remain largely unknown. The nitrogen-fixing bacterium Pseudomonas stu