口腔生物学：第五章 口腔细胞生物学.pptVIP

* 1.形态学：原代培养的颌下腺细胞多数近似圆的立方状，也可见多边形，短梭形。细胞核大，边界清楚，胞质丰富。上皮样细胞也可呈复层生长。细胞呈鹅卵石样排列紧密 二. 培养的唾液腺细胞的生物学特征 * 2.细胞的增殖能力：细胞第六天达增殖最高峰。第三代细胞的倍增时间约为45小时左右。 3.细胞表面标志物： 颌下腺培养的细胞可能包括腺上皮细胞、导管上皮细胞和肌上皮细胞。 腺上皮、导管上皮细胞：细胞角蛋白阳性。 肌上皮细胞：波形丝蛋白和α-SMA阳性。 可以此判断培养的细胞的类型。 下颌下腺细胞分泌淀粉酶、溶菌酶、分泌型IgA等。运用淀粉酶抗体、糖原染色可以确定细胞是否具有合成和外分泌功能。体外培养的下颌下腺细胞随传代次数增加淀粉酶含量逐渐减弱。 * 肌上皮 CK-14 CK-14 腺上皮 * 腺上皮 肌上皮 vimentin 肌上皮 * h-SMG-AMY * h-SMG-ZO-1 h-SMG-E-CAD * 三、生长因子与唾液腺细胞 1.TGF-β3， TGF-β是一种多功能的生长因子，它能调节细胞的生长、分化、形态发生及凋亡，广泛参与机体的各种生理、病理过程。它在下颌下腺的发育、分化过程中起到重要作用。在培养的细胞中加入外源性TGF-β，可以促进鼠下颌下腺细胞的分化以及淀粉酶的分泌，但对细胞的增殖无明显影响。 2.层粘连蛋白(Laminin， LN) 可明显促进原代培养人涎腺细胞的粘附与增殖，对细胞的分化有一定的影响，但不影响细胞淀粉酶的分泌功能。 3.EGF、TGF-α、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)可以促进人下颌下腺细胞的分化，提高淀粉酶促进剂的表达。 * 4.神经递质类物质 异丙肾上腺素可刺激颌下腺增大，促进体外培养的涎腺细胞增殖。此外，在培养基中添加适量的促分泌素，如氯化氨甲酰胆碱、毛果芸香碱等有助于防止颌下腺细胞在体外培养的条件下发生退化。 5.激素类 二氢睾酮、三碘甲状腺氨酸、氢化可的松均对颌下腺细胞生长有促进作用。胰岛素可刺激颌下腺细胞的生长，这种作用与剂量相关。氢化可的松除了有轻度促进有丝分裂作用以外，还可以抑制成纤维细胞的生长。 * 四、研究与应用 组织工程，目前对于组织的缺失和不可逆性功能丧失的治疗方法有限。组织工程技术为腺体重建或修复带来了新的希望。颌下腺是涎腺中分泌量最大的腺体，占唾液分泌总量的60％～65％，涎腺组织工程的研究主要在动物的颌下腺进行。目前尚无组织工程涎腺器官应用于临床。有将鼠涎腺细胞复合支架材料，植入免疫缺陷小鼠皮下。发现有液体积蓄，液体内可检测到淀粉酶。 细胞治疗，修复腺体的受损伤的功能。研究发现体外培养的鼠的涎腺细胞能在鼠的萎缩的颌下腺中生存数周。 腺体功能研究 体外增殖能力有限，多采用永生化细胞。 * 复习： 一.体外培养细胞的特点： 正常细胞在体外增殖能力有限，肿瘤细胞在体外无限增殖。 上皮细胞比间质来源细胞体外增殖能力低。 年轻供体来源组织细胞的增殖能力强。 二. 什么是多能干细胞 （pluripotent）或全能干细胞，能够分化成为人体三个胚层所有类型的细胞和组织 和多潜能干细胞（multipotent）能够分化的细胞类型和产生的组织类型有限。 三.牙齿再生的条件？ 四.体外培养的口腔细胞要进行哪些鉴定？ 五.体外培养的干细胞要进行哪些鉴定？ * Hope you enjoy! * * 区室有两组细胞—干细胞和短暂扩充细胞（transit-amplifying cells，TAC）。干细胞分裂产生两个子细胞，一个维持干细胞的特性（自我更新）,另一个是短暂扩充细胞（祖细胞或前体细胞），继续分化为组织特异的终末细胞，维持组织的更新。位于基底层的干细胞是慢周期细胞（slow-cycling cells），分布并不均匀，以细胞与细胞交流的模式成片分布。 * 上皮细胞片3-5层细胞，不像上皮组织()，而像正常角膜上皮（D）.E. 电镜观察，上皮片顶层形成的微绒毛。F. 上皮片K3免疫荧光染色，绿色。G.β-integrin.H.P63细胞核红色 * A:牙周膜细胞移植后生成牙骨质样结构（C）和牙周膜样结构（PDL）三角：牙骨质样细胞 箭头：成牙骨质样细胞C:牙骨质样结构。D：成牙骨质细胞和牙骨质细胞人特异性线粒体抗体阳性 B: 骨髓间充质干细胞移植后生成骨样结构（B）和骨髓样结构（箭头） C：牙髓干细胞移植后生成牙本质样结构（C）和牙髓样结构（箭头） E：13个克隆中9个在体内形成牙骨质和牙周膜结构，F其他4个没形成。 * 四.体外培养口腔黏膜细胞的应用 疾病发生机理研究，培养各种粘膜病变组织的上皮细胞探讨发病机理