DNARNA蛋白质等各种生物物质的保存.docxVIP

各种生物活性物质的保存 Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读 336 评论 0 字号：大中小 订阅 DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法： （网上搜索，仅供参考 ^_^） 短期保存，两年之内吧，无菌水和 TE缓冲液是 ok 的。如果是长期保存，比如 10 年 20 年的话，我推荐你刚提取好的 DNA 直接保存到乙醇里，放－ 20°，放 10 年没问题。需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或 TE溶解即可。 长期保存用 TE，DNA 本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存容易降解。 保存两年应该会降解的！ 还是不要超过两年， 再一年内都有降解的可能， 所以还是要尽快的利用了。做成干粉不太可能，哪里有那么多的量！还是在－ 80 度以下保存吧，也要避免反复冻融。 如果 DNA 很纯的话，应该影响不是很大啊， 有文献报道高纯 DNA 的最佳保存条件是 4 度，你也可以应证一下你的 DNA 有没有降解啊，跑个电泳看看啊，如果出现 smear，就不要用了啊！ 提纯的 DNA 放在 4 度一段时间（数周 -数月）都没问题。但是长期保存建议 -20 度，并且浓度不要稀释的太低，否则容易降解。 RNA若要长期保存 ,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在 -70 度,用的时 候再离心下来除去无水乙醇 ,用 DEPC水溶解。 保存 RNA应该尽量低温。为了防止痕量 RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的 RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的 RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的 RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的 RNA，在水中保存 3 年仍保持稳定。另外，长度大于 4kb 的转录本对 于痕量 RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存 RNA 样品的稳定性，可以将 RNA 溶解在去离子的甲酰胺中，存于 -70℃。用于保存 RNA的甲酰胺一定不能含有降解 RNA的杂物。来源于胰脏的 RNA 至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用 RNA时，可以使用下列方法沉淀 RNA：加入 NaAc 至， 12,000 ×g离心 5 分钟。 RNA即使是放在 -80 度下也会降解，所以最好的保存方法是将 RNA 逆转成 cDNA 后保存。 提取的 RNA保存在 DEPC处理的水中，加入 RNAse抑止剂，在-80度保存 2 个月，应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。 一旦生物样品被收集采摘， 离体组织的 RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的 RNA降解，或者由于样品采集过程中的应激反应产生新的 RNA都会引起 RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（ Array Analysis）、定量 RT-PCR等实验 来说，采样后立即稳定样品里的 RNA以保存当时 RNA的表达状态， 是精确 / 定量研究基因表达分析的重要前提。记得以前学植物遗传的 同学常常要带着液氮罐， 骑着单车到田里采样 ——那个液氮罐的盖子 有点问题，一颠就冒白烟，吓得一路上行人、车辆纷纷躲避，很是招 摇，据说有一次觉得液氮不够了，赶着坐出租回来，那可是连哄带骗 才上了的士， 到学校时司机已经紧张得面无人色了 ——这真令贪玩的 我们非常羡慕，只恨这等趣事怎么就落不到我们头上。 对当事人来说， 每周一次带着液氮罐到处跑实在不算一种有趣的经历。 没有办法，为 了保持样品的 RNA完整真实，要么当场提 RNA，要么液氮保存，一 直如此。不过自从有了 RNAlater，这种有趣的场面就会越来越少了。 RNAlater 是特殊的样品储存液，只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂， RNlater 可以迅速渗透到组织或其他生物样本中，稳定并保护 RNA完整而不被降解，确保下游分析得到的数据真实反 应样品的表达信息。样品储存液中保存的新鲜样品可以在不超过 37 度的高温天气下保存一天，或者在 25 度室温下保存一周；或者 4 度冰箱存放一个月；或者负 20 度长期保存而使 RNA保持完整免受降解。这种技术为在不同温度和不同地点下的采样、 运输和保存样品提供了极大的方便，同样适合手术 / 解剖过程中部分样品的保存。 RNAlater 的用法非常简单，只要在采样后立即将样品完全浸入适量 10ul/1mg 组织或者 5 倍体积）的 RNAlater 中即可。取样的动作要尽量快速利索， 组织样品的大小以厚度不超过公分为宜。 对于一些小的组织如小鼠的脾、 肾等器官则可以整个取出浸入溶液中， 较大的则 应切开为厚度小于公分的小块，以确保 RNAlater 能迅速扩散渗透入 组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳 10 倍于组织重量的溶液，避免