实验-大肠杆菌的培养与分离ppt参考课件.pptVIP

1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 * 试验一 大肠杆菌的培养和分离 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平板培养基进行细菌的划线培养 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理 实验目的 设备及用品：见课本21页 * 二、大肠杆菌的培养和分离实验操作 （一）培养基的配置与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。 LB液体培养基——细菌的扩大培养 LB固体培养基——细菌的分离和保藏 封口膜：既通气又不使菌进入 * （二）倒平板 灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 * 注意事项： 1、培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。 2、灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒。 3、操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒 精灯火焰旁操作. 4、需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌。 5、平板冷凝后，要将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 * （三）大肠杆菌的扩大培养 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。 注意事项: 1、火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2、取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌，冷却后方能取菌; 3、取菌后封口膜和棉塞复原. * （四）大肠杆菌的划线分离 分离方法:划线分离法和涂布分离法 * 平板划线的操作 1、划线分离法：无菌操作台上用接种环取菌后在固体培养基的平板上连续划线. * 不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。 * 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 * * 分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 * * （四）大肠杆菌的划线分离 注意事项: 1、接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2、划线首尾不能相接。 3、划线后，培养皿倒置培养12~24h。 1、划线分离法 * 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 * 生物技术概述 生物技术也叫生物工程,是应用自然科学及工程学的原理,以微生物、动物、植物作为反应器,将物料进行加工,以提供产品为社会服务的技术。 例如：以酵母为反应器制酒、以醋杆菌为反应器制醋、以转基因的大肠杆菌为反应器生产生长激素、以羊为反应器生产人乳。 * 生物工程发展史 1、传统生物技术 如酿酒、制作酸奶、污水处理、垃圾处理 * 2、现代生物技术 利用大肠杆菌生产胰岛素、生长激素、促红细胞生成素等药品。 * 现代生物工程包括: 细胞工程、 发酵工程、 酶工程、 蛋白质工程、 基因工程 * 基因工程：剔除或改变有害基因，引入正确基因或有利基因。 * 第一部分 :微生物的应用 * 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构. 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物 原生生物 真菌 一、基础知识： (一)微生物 ：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． * (二)细菌的常识 1、结构 2、分裂 3、生殖 4、在基因工程中的应用 * 大肠杆菌 * 细菌的外形与大小 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.螺旋菌