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细胞培养技术练习题 选择题 1.接种工具灭菌常采用（ A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸 2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸 3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml 4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.4400 5.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素 B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.1 6.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C 7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA 8.下面哪种是 MS 培养基大量元素所用药剂（ A ） A. 硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜 填空： 1、组织块的分离方法有 机械分散法 、 剪切分离法 、 消化分离法 。 2、目前，较常用的消化试剂有 胰蛋白酶 、 胶原酶 、 EDTA 消化液 。 3、接种培养瓶的细胞数量一般为 5× 105-1× 106/ml 。 4、培养细胞的污染一般包括 微生物污染 、 细胞交叉污染 、化学物质的污染。 5、细胞冻存时 DMSO 常用的浓度为 10%的浓度 。 1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要 贴壁生长 和 悬浮生长 两种，分别称为 贴壁型 细 胞和悬浮型细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以 贴附生长 为主。 2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为 成纤维细胞型 、 上皮细胞型、 游走细胞 型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。 3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是 贴附生长 、 接触抑制 和密度依赖性。 4. 培养细胞生命期可分为 原代培养期 、 传代培养期 、 衰退期 三个阶段。 名词解释 1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。 2、组织块培养法：组织块培养是将组织剪切成小块后，接种于培养瓶进行培养。组织块培养法是常用的，简便易行的以 及成功率较高的原代培养方法。 3、消化培养法： 消化培养法是采用组织消化分散法将细胞间质包括基质、 纤维等妨碍细 胞生长的物质去除，使细胞分散，形成悬液，从而易于外界吸收养分和排出代谢产物 . 4、细胞生长曲线：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。以培养时间为横轴，细胞浓度为纵轴作图，即得生长曲线。 5、传代：细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。 问答题： 1、如何得到单细胞无性系？ 在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可 以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。 由分离的单细胞经看护培养法、 微室培养法或平板培养法， 即可得到单细胞无性系 2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点 单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养 （ 1）看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 特点：①简便易行。 ②效果好，易于成功。 ③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。 2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。 特点：在培养过程中可连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。 3）平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。特点：可以定点观察；分离单细胞系比液体浅层培养容易；培养细胞气体交换不畅。 3、说明每一种单细胞培养方法的要点？ （ 1）看护培养： ①小三角瓶中加 1cm 厚的固体培养基， 灭菌②将 1cm 大小的愈伤组织块放在培养基中央。 ③在愈伤组织 块上放 1cm2 无菌滤纸片，培养室中过夜④将单个细胞接种在滤纸上面⑤培养室培养 f1 个月可见愈伤组织小块， 2-3 个 月得到单细胞无性繁殖系。 （ 2）微室培养：①载玻片和盖玻片火焰上消毒②在载玻片上涂一圈四环素眼膏，放一小段毛 细管。滴一小滴细胞悬浮液于凹穴中③盖上盖玻片，使之与悬浮液接触（ 3）平板培养：①制备单细胞悬浮液：用酶法或 机械震荡法将组织器官游离出单细胞。经过滤后的滤液即是。②悬浮液密度的调制： a 通过显微镜，观察记数板凹槽中 的悬浮液细胞数，并计算其密度。 b 一般平板培养要求细胞密度为 1′103-1 ′105。③培养基的配制： 1）1.4%琼脂培养基 ; 2)0.7