第十八章高效液相色谱法.docx

第十八章高效液相色谱法 15.外标法测定黄芩颗粒剂中黄芩苷含量：色谱柱为 Zirchrom C8柱（20cmX 4.6mn, 5um）；流动相为乙腈-甲醇-水（含0.5%三乙胺，磷酸调pH3.0）（28： 18： 54）;以黄芩苷 对照品配成浓度范围为10.3?144.2ug/ml的对照品溶液。进样，测得黄芩苷峰面积，以峰 面积和对照品浓度求得回归方程为： A=1.168 X 105c-1.574 X 103, r=0.9998.精密称取黄芩 颗粒0.1255g，置于50ml量瓶中，用70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取 1ml于 10ml量瓶中，30%甲醇定容到刻度，摇匀即得供试品溶液。平行测定供试品溶液和对照品溶 液（61.8ug/ml ），得峰面积分别为 4250701，5997670. 解:A样c样 /10 425070161.8 5997670w%50c 解: A样 c样 /10 4250701 61.8 5997670 w% 50c样 10 6 100% 17.4% 0.1255 16 .校正因子法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量： ODS色谱柱；甲醇-水（60:40）流动相；检测器UV280nm 对硝基甲苯为内标物。 （1）校正因子的测定：取对硝基甲苯（内标物） 、炔诺酮和炔雌醇对照品适量，用甲醇制成 10ml溶液，进 样10ul，记录色谱图。重复三次。测得含 0.0733mg/ml内标物、0.600mg/ml炔诺酮和0.035mg/ml炔雌醇的对照 品溶液平均峰面积列于表 18-6。 （2）试样测定：取本品 20片，精密称定，求出平均片重（60.3mg/片）。研细后称取732.8mg （约相当于炔 诺酮7.2mg），用甲醇配制成10ml供试品溶液（含内标物 0.0733mg/ml ）。测得峰面积列于表 18-6。 表18-6复方炔诺酮片中各成分及内标物平均峰面积（ uv ? s） 炔诺酮 炔雌醇 内标物 对照品溶液 1.981 X 106 5 1.043 X 10 5 6.587 X 10 供试品溶液 6 2.442 X 10 1.387 X 10 6.841 X 10 m醇 /A醇 0.035 10/(1.043 105) 302 ms/As 0.0733 10/(6.587 105) 试样含炔雌醇的量： r A 醇 c cc 1.387 105 c 八 c/ \ m醇 f醇 ms 3.02 0.0733 10 0.449(mg) As 6.841 105 每片含炔雌醇的量： 0 449 , 0.449 60.3 (0.0369mg/ 片) 732.8 17.测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量，称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品 各0.2000g配成混合溶液。测得峰面积分别为 3.60, 3.43 和4.04cm2。称取0.2400g内标 物和试样0.8560g同法配制成溶液后，在相同色谱条件下测得峰面积为 4.16, 3.71 和 4.54cm2。计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。 解：f黄m 解：f黄 m黄/A黄 As ms/As A黄 3.60 3.43 1.05 18 .计算在反相色谱中甲醇—乙腈—水（ 60:10:30 ）的强度因子。如果改用四氢呋喃—甲醇—水，水的含量 不变，为了保持相同的洗脱强度，甲醇的比例是多少 ？ 解：S混 S 解：S混 S甲甲+ S乙乙+ S水水 3.0 0.60+ 3.2 0.10+ 0 0.30 2.12 设改换溶剂后，甲醇的比例为 x，则 x = 0.687 = 68.7% 19.用15cm长的ODS柱分离两个组分。柱效  n=2.84 x 104m-1;测得 t°=1.31min ;组分 的 tR1 4.10min; tR2 =4.45min。 (1)求 k、k?、 可否达1.5? 解 :(1) k1 tR/ tR1 t 0 4.10 1.31 t0 t0 1.31 ⑵ 由 Rf r2 L1，则 1.02 R2 0.15 L2 0.30  a、R值。（2）若增加柱长至30cm,分离度R 2.13 R 2 = 1.4（达不到 1.5）