第04章 疫苗的制备与检定技术1[宣讲].pptVIP

选为强毒的菌、毒种应做以下工作： 细菌或病毒分离、纯化和鉴定 细菌或病毒的毒力测定 细菌或病毒的抗原性测定 细菌或病毒的稳定性测定 细菌或病毒的冻干保存 * 精品PPT | 借鉴参考 菌毒种的管理: 三级管理模式：原始种子批、主种子批和工作种子批。 原始种子批（primary Seed lot）：一定数量的已验明其来源、历史和生物学特性并经临床研究证明其安全性和免疫原性良好的病毒株（或菌株）或用于制备原疫苗的活病毒（或菌体）悬液。该悬液应加工为单一批，以确保其组成均一，并经充分检定。用于制备主种子批。 主种子批（Master Seed lot）：一定数量的来自原始种子批的病毒株（或菌株）或用于制备原疫苗的活病毒（或菌体）悬液。该悬液应加工为单一批，以确保其组成均一，并经全面检定。用于制备疫苗生产用的工作种子批。 工作种子批（Working Seed lot） ：按NCA批准的方法，从主种子批传代而得到的活病毒或细菌悬液。用于生产疫苗。 * 精品PPT | 借鉴参考 第04节 灭活剂、免疫佐剂和保护剂 一、灭活与灭活剂 灭活（inactivation）：破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但不损害其免疫原性，用以制备灭活疫苗。 灭活方法：物理方法：加热、紫外线和射线照射 化学方法：化学试剂，如甲醛，β-丙内酯等。甲醛是最常用的灭活剂。 灭活剂（inactivator）：用于灭活微生物的化学试剂如甲醛溶液、烷化剂、苯酚、结晶紫、β-丙酰内脂等。 * 精品PPT | 借鉴参考 (一)甲醛溶液 (Formaldehyde solution) 甲醛为无色气体，有强烈的刺激性，对眼、鼻黏膜和上呼吸道有刺激性。易溶于水合乙醇。其水溶液（36%～40%）称为福尔马林(Formalin)。 甲醛最古典的灭活剂，但也是目前最主要的灭活剂。 灭活机理：甲醛的醛基与蛋白质的氨基、羧基、羟基和巯基反应，分别形成羟甲基胺、亚甲基二醇单酯、羟甲基酚和硫代亚甲基二醇等，使病毒、细菌等微生物的蛋白质构象发生改变，从而使其失活。但对其免疫原性无明显影响。 另外，甲醛还可以与核酸中的碱基（A、G和C）上的氨基反应，与核糖体蛋白的氨基反应，从而影响核酸和核糖体的功能。 * 精品PPT | 借鉴参考 无囊膜的二十 面体对称病毒 有囊膜的二十 面体对称病毒 有囊膜的螺 旋对称病毒 甲醛与蛋白的氨基结 合形成羟甲基或二羟 甲基衍生物，后者与 酰胺或胍基团反应导致蛋白变性。 甲醛与核酸中含氨基的A、G、C反应使核酸变性。 * 精品PPT | 借鉴参考 灭活用甲醛浓度： 基本原则：浓度随不同微生物而异。 1）需氧菌：0.1%～0.2%。 2）厌氧菌：0.4%～ 0.5%。 3）病 毒：0.05%～ 0.4% 。 其他灭活条件：37℃，24～48hrs。有时灭活时间会更长，如破伤风类毒素用0.4%的甲醛，37℃需灭活21～ 23天。 * 精品PPT | 借鉴参考 （二）烷化剂 (alkylating agent) AEI：N-乙酰基乙烯亚胺 BEI：二乙烯亚胺 GDA：缩水甘油醛 * 精品PPT | 借鉴参考 烷化剂的灭活机制： 1）烷化DNA分子中的G或A，引起单链断裂或双链交联，改变DNA的结构而破坏其功能。 2）可与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。 这类灭活剂能破坏病毒的核心，使病毒完全丧失感染力，一般不损害其衣壳蛋白，故能维持其免疫原性。 * 精品PPT | 借鉴参考 * 精品PPT | 借鉴参考 石炭酸：苯的一部分被酚取代的化合物。 灭活机制：使微生物的蛋白质变性，或抑制微生物的特异酶系统，使其失去活性。 制备疫苗时的用量：0.3%～0.5%。 （三）苯酚 (phenol) * 精品PPT | 借鉴参考 （四）结晶紫 (crystal violet) 一种碱性染料。 灭活机制：其阳离子与微生物蛋白质带负电的羟基形成弱电性化合物，妨碍微生物的正常代谢。 （五）β-丙内酯(propiolactone, β-PL) 一种良好的病毒灭活剂，但具有致癌性 作用机理：可能是作用于病原体的DNA和RNA，而不直接作用于蛋白，有利于维持病毒的免疫原性。 1984年被选为狂犬病灭活苗的制备。 * 精品PPT | 借鉴参考 筛选灭活剂的基本原则： 选择合适的灭活剂，或研发更为优良的灭活剂是生物制品行业的一项重要工作。目前，甲醛最常用，N-乙酰基乙烯亚胺(AEI)和二乙烯亚胺 (BEI)也被