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上海科兴生物科技有限公司原始创新，自主创新，挥重金购置最新、最先进的仪器设备，支持研发，支持 服务。 目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括： ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析 (limiting dilution analysis , LDA)和单细胞PCR ,应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达 及mRNA表达可以识别Th1和Th2细胞，此方法可获得较强的细胞内信号，但此方法工作量大、主观性 强，难以进行大样本检测，且人肉眼识别能力有很大的局限性，而 ELISPOT及单细胞PCR技术，技术性 强、劳动强度大，难以进行广泛推广。随着多标记及胞内 细胞因子 标记流式细胞技术的出现,使对细胞 内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。下面主要对胞内细胞因子流式细胞技术作以介绍。 早期细胞因子表达与细胞功能相关性研究是基于特定克隆 ”＞克隆细胞的激活。尽管研究应用 T淋巴细胞克 隆”＞)与TH2(IL - 4, IL- 5, IL—10),但这些研究很难外推，因为 T细胞克隆”g克隆证明了不同细胞因子 的合成，如TH1(IL - 2 , IFN - ＞克隆与体内T细胞功能相关性还未被揭示。 快速：流式定量检测细胞内细胞因子可在一天内完成，实验流程需 6-8小时，实际操作时间为 1-2小时， 快速简便； 简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离 PBMCs ; 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统； 高效：可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的 细胞的亚型，进行多参数相关分析； 安全：减少样本处理与生物源性污染 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境更准确反映了体内状况。 二、 所需仪器 1、 流式上样管及细胞培养皿或板 2、 25%CO2 , 37 C 孵箱 3、 混匀振荡器 4、 离心机 5、 加样器、Tips 6、 流式细胞仪 三、 常用的标本类型和处理方法 全血：使用肝素钠抗凝的真空采血管采血， 不易采用肝素锂、EDTA和ACD抗凝剂，血样在8小时内分析, 超过8小时会导致活性的损失，一般细胞因子阳性细胞会减少 5%。如不能在8小时之内检测，应将真空 采血管水平室温放置。