2020临床基因扩增检验实验室设置质量管理.ppt

临床基因扩增检验实验室的 设置、质量管理体系的建立 及其技术验收 云南省临床检验中心 杜廷义 2007 ， 12 ， 20 题外话： ? 不参加实习课??？ ? 参加实习课??？ 对相关管理文件的理解： ? 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 ? 临床基因扩增检验实验室基本设置标准 （第六条） ? 临床基因扩增检验实验室工作规范（第 十条、第十三条、第十四条） ? 临床实验室必须遵循的管理办法及其它 行业标准 强调： ? 污染的控制：预防为主 ? 质量保证 污染的途径： ? 实验材料 ? 试剂每一成分 ? 设备的每一部位 ? 每一操作步骤 污染的判断： ? 经验： 全阳性， CT 值 35 ；标准品的 CT 值发生波动 阴性质控阳性 阳性率异常增高 ? 轻微污染和非特异性扩增？ 污染和非特异性扩增 : ? 目的基因 ? 过程控制 ? 反应体系 （引物、模版、 酶、镁离子、退火、循环） ? 条件优化 控制的手段： ? 工作区的严格划分 ? SOP 的制订和严格执行 ? 去污染措施的常规采用 污染的监测： ? 阴性质控的设置： 阴性血清样本 以水为模拟标本 仅含扩增反应液 （加鉴别实验室是否污染的空白管 ) 质控品的位置 标准品－空白－阳性质控－阴性质控－临床样本 标准品－空白－阳性质控－临床样本－阴性质控 实验室的设置 ? 管理要求：设置标准和工作规范 ? 具体落实：实事求是、因地制宜 设置标准和工作规范 “原则上分为四个分隔的工作区；?? 各区必 须有明确的标记??” “每一区域都须有专用的仪器??；不同的工作 区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服??； 离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出??” “??，可在开展临床标本检测前对提取方法进 行评价” “??，本区如采用副压条件或减压情况下可减 少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。 理想的设置 缓冲间 缓冲间 扩增区 试剂准备区 样本制备区 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 专用走廊 工作流向 磁性连锁装置 现实的问题是： ? 建筑结构 ? 通道、门 ? 水电供应 ? 采光、通风 基本的要求 : ? 四个区域必须是相互独立的 ? 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的 ? 各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作 服及鞋子用 ? 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。 扩增区 试剂准备区 样本制备区 产物检测区 其它实验室 走 廊 实例： 其它实验室 样本制备区 扩增区 试剂准备区 产品检测区 走廊 实例： 实例： 产物检测区 扩增区 样本制备区 其它实验室 休 息 区 试剂准备区 扩 增 区 产物检测区 走廊 模板加样区 实例： 样本处理区 实例： 小结： ? 处理原则的核心是通过合理的设置解 决好临床 PCR 检测实际运作 动态过程 中可能发生的污染的预防问题 ? 因此，实验室的设计必须充分考虑到 对污染来源和污染途径的预防和控制 实验室各区的功能和配置： 试剂储存和准备区 ? 储存试剂的制备 ? 试剂的分装 ? 主反应混合液的制备 ? 冰箱 ? 混匀器 ? 微量加样器 ? 可移动紫外灯 ? 专用工作服和工作鞋 ? 消耗品（带滤心吸头、离 心管、一次性手套等） ? 专用办公用品等。 标本制备区： ? 临床标本的保存 ? 核酸提取、储存 及其 加入至扩增 反应管 ? 测定 RNA 时 cDNA 的 合成 ? 不得在本区对样 本进行 PCR 扩增 ? 冰箱 (2~8℃和 - 20℃或 - 80℃) ? 高速台式冷冻离心机 ? 水浴箱和 / 或加热模块 ? 生物安全柜 ? 混匀器 ? 微量加样器 ? 可移动紫外灯 ? 专用工作服和工作鞋 ? 专用消耗品 ? 专用办公用品等 扩增区： ? DNA 或 cDNA 扩增 ? 已制备的 DNA 模板和合 成的 cDNA 的加入 ? 主反应混合液制备成反 应混合液 ? 如果空间允许的话，模 板的加入也可以在一个 独立的空间内完成 ? 核酸扩增仪 ? 微量加样器 ( 视情况 定 ) ? 可移动紫外灯 ? 专用工作服和工作鞋 ? 专用消耗品 ? 专用办公用品等 产物分析区： ? 扩增片段的测定 ? 最主要的扩增产物污 染来源 ? 有可能使用致突变和 有毒物质 ? 微量加样器 ? 可移动紫外灯 ? 专用工作服和工作鞋 ? 专用消耗品 ? 专用办公用品等