(完整版)外泌体提取方法总结.docVIP

1、 细胞培养上清：即在 4℃下，首先 300×g离心 10 min，吸取上清液，然后 2 000 ×g离心 10 min ；吸取上清液后， 10 000 ×g 高速离心 30 min ，吸取上清液； 140000×g超速离心 90 min ；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体。用 PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后， 140 000×g 再次离心 90 min ，100 μL PBS 缓冲液重悬沉淀，冻存于 - 80℃备用。 2、 将小鼠或人血收集在 1.5mL 管中，并使其在 37℃下凝结 1 小时而不进行抗凝。 此后，将其以 2,000 ×g离心持续 10 分钟获得血清。接着将血清以 3,000 ×g离心 10 分钟。将上清液以无菌 PBS 以 1：1 的比例稀释并离心再次以 10,000 ×g保持 30 分钟，然后以 200,000×g进行 2 小时超速离心。 将颗粒在 a 中洗涤大量 PBS，通过 0.2- μm注射器过滤器过滤，并以 200,000×g离心 1 小时，然后收集沉淀并重悬于 PBS或 PBS中用于后期功能或生化测定的 培养基。 3、 为了从体液（例如尿液，支气管肺泡灌洗液， 血清，血浆，肿瘤腹水）中纯化外泌体，只需通过常规方法收集液体即可。 血浆用紫色的管子，EDTA抗凝，血清的话不抗凝直接离心。在 4°C下在玻璃瓶中储存长 达 5 天，直至进行外泌体纯化。